Спирохета сифилиса - микробиология с техникой микробиологических исследований. Бледная трепонема – возбудитель сифилиса Культуральные и биохимические свойства

Содержание статьи

Бледная трепонема

Морфология и физиология

T.pallidum имеет форму спирали, протоплшматический цилиндр, который скручен в 8-12 завитков. От концов клетки отходят 3 периплазматических жгутика. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители, поэтому ее окрашивают краской Романовского-Гимза. Однако наиболее эффективным методом является ее изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе. Микроаэрофил. На искусственных питательных средах не растет. Т. pallidum культивируют в ткани яичка кролика, где она хорошо размножается и полностью сохраняет свои свойства, вызывая у животного орхит. Антигены. Антигенная структура Т. pallidum сложная. Она связана с белками наружной мембраны, липопротеидами. Последние являются перекрестно реагирующими антигенами, общими для человека и крупного рогатого скота. Они используются в качестве антигена в реакции Вассермана для серодиагностики сифилиса.

Патогенность и патогенез

К факторам вирулентности бледной трепонемы относят белки наружной мембраны и ЛПС, проявляющие свои токсические свойства после освобождения из клетки. Вместе с тем, по-видимому, способность трепонемы при делении образовывать отдельные фрагменты, проникающие вглубь тканей, также можно отнести к факторам вирулентности. В патогенезе сифилиса различают три стадии. При первичном сифилисе наблюдается образование первичного очага - твердого шанкра в месте входных ворот инфекции, с последующим проникновением в регионарные лимфоузлы, где возбудитель размножается и накапливается. Первичный сифилис продолжается около 6 недель. Вторая стадия характеризуется генерализацией инфекции, сопровождающейся проникновением и циркуляцией возбудителя в крови, что сопровождается кожными высыпаниями. Продолжительность вторичного сифилиса у нелеченых больных колеблется в пределах 1-2 лет. В третьей стадии обнаруживаются инфекционные гранулемы (гуммы, склонные к распаду), локализующихся во внутренних органах и тканях. Данный период у нелеченых больных продолжается несколько лет и заканчивается поражением ЦНС (прогрессивный паралич) либо спинного мозга (спинная сухотка).

Иммунитет

При сифилисе имеет место гуморальный и клеточный иммунный ответ. Образующиеся антитела не обладают протективными свойствами. Клеточный иммунный ответ связан с фиксацией возбудителя и образованием гранулем. Однако элиминации трепонем из организма при этом не происходит. Вместе с тем неблагоприятные условия среды индуцируют образование трепонемами цист, которые локализуются в стенке кровеносных сосудов. Полагают, что это свидетельствует о переходе заболевания в стадию ремиссии. Наряду с цистами трепонемы образуют L-формы. При сифилисе формируется ГЗТ, которая может быть выявлена кожно-аллергической пробой с убитой взвесью трепонем. Полагают, что проявление третичного периода сифилиса связано с ГЗТ.

Экология и эпидемиология

Сифилис - типично антропонозная инфекция. Болеют только люди, которые являются резервуаром инфекции в природе. Передача инфекции происходит половым путем и значительно реже - через белье и другие предметы. Во внешней среде (воздух) трепонемы быстро погибают.

Сифилис и другие трепонематозы

Сифилис - хроническая инфекционная венерическая болезнь человека, имеет циклический прогрессирующее течение, поражает кожу, слизистые оболочки, внутренние органы и нервную систему. Возбудителем заболевания является Treponema pallidum.Различают три основные периоды развития сифилиса, методы лабораторной диагностики которых имеют свои особенности. В ранний период болезни материалом для лабораторной диагностики служит выделение из твердого шанкра, пунктат с лимфатических узлов, соскобы с розеол, сифилид подобное. При вторичном и третичном периодах исследуют сыворотку крови и ликвор.В связи с тем, что выделение чистых культур трепонем в обычных бактериологических лабораториях невозможно, во время первичного периода болезни (редко позже) проводят бактериоскопический метод диагностики. Начиная с вторичного периода, используют, в основном, серологические методы.

Бактериоскопическое исследования

Перед взятием патологического материала сначала сифилитическую язву протирают ватным тампоном, для удаления сального налета и контаминуючои микрофлоры. Затем дно твердого шанкра раздражают скальпелем или металлической лопаточкой или энергично сжимают язву с боков пальцами в резиновой перчатке к выделению раневого экссудата. При небольшомколичества прозрачной жидкости ее можно внести в каплю 0,85% раствора хлорида натрия. При невозможности взять материал со дна шанкра (фимоз, рубцевание язвы и др.) проводят пункцию регионарных лимфатических узлов.Каплю жидкости из язвы или пунктата наносят на тонкое предметное стекло (1,1-1,2 мм), накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле зрения (краще!), или с помощью фазово-контрастного или аноптрального микроскопа.Бледная трепонема в темном поле зрения имеет вид слегка блестящей тонкой нежной спирали с крутыми равномерными округлыми первичными завитками. Движения плавные, тем она изгибается под углом. Но особенно характерные для нее Маятникообразные колебания. Возбудитель сифилиса необходимо отличать от Treponema refringens (что колонизирует наружные половые органы), которая толще, грубее, с неравномерными крупными завитками и имеет активные беспорядочные движения, но не сгибается. Трепонемы фузосп-ирохетозного симбиоза отличаются тонким рисунком, пологими завитками и беспорядочным движением.При диагностике ротового сифилиса бледную трепонему следует дифференцировать и от зубных трепонем, особенно Т. dentium, а также от Т. buccalis. Первую из них вообще трудно отличить от сифилитического. Она, правда, короче, имеет 4-8 острых завитков, маятникообразное движение отсутствует. Т. buccalis толще, имеет грубые первоначальные завитки и беспорядочное движение.При любых сомнениях нужно учитывать, что все сапрофитные трепонемы, в отличие от бледной, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Они не проникают в лимфатические узлы, поэтому исследования пунктатов имеет большую диагностическую ценность. Выявление в пунктате лимфатических узлов типовых трепонем беспрекословно подтверждает диагноз сифилиса.Итак, темнопольная исследования надавленные капли является наилучшим методом выявления возбудителя сифилиса. Его преимущества заключаются в том, что материал исследуют быстро, а морфология трепонем в живом состоянии наиболее характерна. Тушови мазки по методу Бурри теперь не используют.В случае невозможности провести исследование в темном поле зрения можно использовать различные методы окрашивания. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители. Из многих предложенных способов окраски лучшие результаты получают при использовании окраски по Романовеьким-Гимзе. Изготовленные мазки фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова. Четкость результаты получают, когда краску Романовского-Гимзы наливают в препарат. Для этого в чашку Петри помещают обломки спичек, на них помещают предметное стекло мазком вниз и наливают краситель до тех пор, пока он смочите мазок. Время окраски при этом удваивают. При микроскопии бледные трепонемы имеют нежно-розовый цвет, а другие виды трепонем окрашиваются в синий или сине-фиолетовый цвет.Можно использовать и метод серебрения Морозовым. Трепонемы полностью сохраняют свои морфологические особенности и выглядят под микроскопом коричневыми или почти черными. Но посеребренные препараты долго не хранятся. В последнее время методы окрашивания трепонем применяют редко.Если начато лечение сифилиса химиопрепаратами, выявить возбудитель в патологических материалах даже с помощью темного поля зрения практически не удается. При получении отрицательного анализа его необходимо повторить.

Серологическая диагностика сифилиса

При проведении серологических реакций теперь используют следующие унифицированные в Украине методы исследований: реакции связывания комплемента (РСК), иммунофлуоресценции (РИФ), иммобилизации трепонем (PIT), микрореакцию преципитации (МПР) и иммуноферментный анализ (ИФА).На протяжении многих лет основной и наиболее распространенной реакцией считалась реакция связывания комплемента или реакция Вассермана (РВ, RW). Для ее постановки используют сыворотку крови больного сифилисом и спинномозговую жидкость при поражении нервной системы.Методика постановки реакции Вассермана не отличается от техники проведения РСК. Разница лишь в том, что для РО используют не только специфический трепонемный, а неспецифический кардиолипиновый антиген.l Взятие 5-10 мл крови из локтевой вены проводят натощак или не ранее 6 часов после приема пищи. Нельзя брать кровь у больных с повышенной температурой, после употребления алкоголя и жирной пищи, у беременных женщин за 10 дней до родов и рожениц. Добытую из крови сыворотку прогревают при температуре 56 ° С в течение 30 мин для инактивации собственного комплемента. РО обязательно ставят с двумя антигенами: специфическим и неспецифическим.Специфический ультраозвучений трепонемный антиген готовят из культур бледных трепонем (штамм Рейтера), выращенных в пробирках и подверженных действию ультразвука. Его выпускают в виде лиофильно высушенного порошка. Неспецифический кардиолипиновый антиген готовят путем спиртового экстрагирования липидов с бычьего сердца и очистки от балластных смесей, расфасовывают в ампулы по 2 мл. Для введения антигена в РО его титруют согласно данной инструкции. Непосредственно перед постановкой РВ проводят титрование комплемента и гемолитической сыворотки по такой же схеме, как и в РСК. Реакцию Вассермана ставят как качественным, так и количественным методом. Качественную реакцию проводят в трех пробирках с двумя антигенами по обычной схеме.Результаты реакции оценивают по 4 плюсовой системе: положительная реакция - когда есть полная или значительная задержка гемолиза (4 +, 3 +); слабоположительная реакция - частичная задержка гемолиза (2 +); сомнительная реакция - незначительная задержка гемолиза (1 +). В случае возникновения полного гемолиза РО считают отрицательной.Каждую сыворотку, которая дала положительную качественную реакцию, необходимо исследовать и количественным методом с последовательным ее разведением от 1:10 до 1:640.Титром исследуемой сыворотки (титр реагинов) считают то максимальное ее разведение, при котором наступает полная (4 +) или значка (3 +) задержка гемолиза. Количественный метод постановки РО имеет важное значение для оценки эффективности лечения сифилиса. Быстрое снижение титра реагинов указывает на успешную терапию. Если титр сыворотки долго не снижается, это свидетельствует об отсутствии эффективности применяемых препаратов и необходимость изменить тактику лечения.При пилозри на серонегативный первичный сифилис или скрытый, третичный или врожденный, рекомендуют ставить реакцию Вассермана на холоде по той же схеме. В случае подозрения на нейросифилис РО проводят со спинномозговой жидкостью, которую инактивируют, поскольку она не содержит собственного комплемента. В реакцию вводят неразведенный ликвор и в разведениях 1:2 и 1:5.Реакция Вассермана становится положительной через 2-3 недели после появления твердого шанкра. При вторичном сифилисе она выпадает положительной в 100% случаев, в третичном - в 75%.Кроме того, в комплексе серологических реакций (КСР) как скрининг-тест используют микрореакцию преципитации с плазмой крови или инактивированной сывороткой.

Микрореакция преципитации

Микрореакцию преципитации ставят с кардиолипиновым антигеном. Принцип реакции заключается в том, что при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген-антитело), который осаждается в виде хлопьев белого цвета. Пользуются такой методике: в лунку пластины вносят пипеткой три капли плазмы (или инактивированной сыворотки), затем добавляют одну каплю эмульсии стандартного кардиолипинового антигена. Компоненты реакции смешивают встряхиванием пластины в течение 5 мин, после чего добавляют три капли 0,9% раствора хлорида натрия и оставляют при комнатной температуре еще на 5 мин. Обязательном контроле со слабоположительный сывороткой крови. Результаты оценивают невооруженным глазом над искусственным источником освещения. При появлении в лунке крупных хлопьев реакцию считают положительной (4 +, 3 +), средних и мелких - как слабоположительные (2 +, 1 +). При отрицательном результате преципитат не образуется.Микрореакцию преципитации можно проводить и количественным методом для установления титра преципитирующих антител и оценки на этой основе эффективности лечения. Более высокие титры МРП получают с плазмой, чем с сывороткой. За рубежом аналогом МРП с сывороткой больного является VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а с плазмой - RPR (Rapid plasma reagin).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

К группе специфических реакций, которые широко употребляются для серологической диагностики сифилиса, относится непрямая реакция иммунофлюоресценции. Как антиген, в ней используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из паренхимы яичек кролика на 7-й день после заражения. Реакцию ставят в двух модификациях: РИФ-АБС и РИФ-200. В первом варианте используют сорбент антител (соникат) - ультраозвучений трепонемный антиген для РСК. Его выпускает Каунасское предприятие по производству бактерийных препаратов (Литва). При варианте РИФ-200 сыворотку больного разводят в 200 раз с целью снять влияние групповых протитрепонемних антител.Постановку РИФ-АБС проводят на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах. На обратной стороне стекол стеклорезом обозначены 10 кружочков диаметром 0,7 см. В рамках кружка на стекло наносят антиген - взвесь бледных трепонем - в таком количестве, чтобы в поле зрения их было 50-60. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем и 10 мин в ацетоне. В отдельную пробирку вносят 0,2 мл сорбента (соникату) и 0,5 мл сыворотки крови больного, хорошо перемешивают. Смесь наносят на мазок (антиген) так, чтобы равномерно его покрыть, выдерживают 30 мин во влажной камере при 3 7 ° С (II фаза реакции). После этого мазок промывают фосфатным буфером, высушивают и наносят на него антишобулинову флуоресцентных сыворотку на 30 мин, ставят во влажную камеру при 37 ° С (II фаза). Препарат вновь промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом.При положительной реакции бледные трепонемы излучают золотисто-зеленый свет, при отрицательной - не светятся.Техника постановки РИФ-200 такое же, как и РИФ-АБС, только сыворотку крови больного предварительно разводят в 200 раз фосфатным буфером. При проведенииреакции иммунофлюоресценции со спинномозговой жидкостью больного сифилисом нервной системы используют РИФ-ц и РИФ-10, т.е. ликвор вводят в реакцию неинактивованим и разведенным, или разведенным 1:10.

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT)

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT) основан на феномене потери их подвижности в присутствии иммобилизирующие протитрепонемних антител сыворотки больного и комплемента в условиях анаэробиоза. Как антиген в реакции используют взвесь бледных трепонем из тестикулярной ткани кролика, зараженного лабораторным штаммом Никольса. Взвесь разводят стерильным 0,85% раствором хлорида натрия так, чтобы в поле зрения было 10-15 спирохет.Для проведения реакции в стерильной пробирке смешивают 0,05 мл сыворотки крови больного, 0,35 мл антигена и 0,15 мл комплемента. Опыт сопровождают контролями сыворотки, антигена и комплемента. Пробирки помещают в анаеростат, создают анаробни условия и выдерживают в термостате 18-20 ч при температуре 35 ° С. Затем из каждой пробирки готовят препарат надавленные капли, подсчитывают не менее 25 трепонем и отмечают, сколько из них подвижных и сколько неподвижных. Процент специфической иммобилизации бледных трепонем подсчитывают по формуле: х = (А-В) / В * 100, где X - процент иммобилизации, А - число подвижных трепонем в контрольной пробирке, В - число подвижных трепонем в опытной пробирке. Реакция считается положительной, когда процент иммобилизации составляет 50 и более, слабоположительный - от 30 до 50, сомнительной - от 20 до 30 и отрицательной - от 0 до 20.В практических лабораториях используют более простой меланжерний метод PIT за М.М. Овчинниковым. Анаэробные условия опыта создаются помещением реагирующей смеси (сыворотки, антиген, комплемент) в меланжеры, оба конца которого закрывают резиновым кольцом. Меланжерна методика позволяет обойтись без сложного оборудования и аппаратуры для создания анаэробиоза, но дает такие результаты, которые не посту паються классической микроанаеростатний методике.Реакции иммобилизации трепонем и иммунофлуоресценции считают наиболее специфичными в серологической диагностике сифилиса. И все же, PIT, несмотря на ее специфичность, не рекомендуют для использования в широкой практике из-за трудоемкости постановки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят как с кадриолипиновим антигеном (неспецифическая, отборочная реакция), так и трепонемным (специфическая реакция), которая подтверждает диагноз сифилиса.Принцип непрямого метода ИФА заключается в том, что в антигена, адсорбированного на твердой фазе в лунках планшета вносят исследуемую сыворотку. Если она содержит антитела против трепонем, образуется комплекс антиген-антитело (II фаза). После отмывания несвязанных неспецифических антител в лунки вносят антиглобулинову сыворотку, конъюгированные с ферментом (чаще всего с пероксидазой хрена). Конъюгат прочно присоединяется к комплексу антиген-антитело (II фаза).После отмывания несвязанного конъюгата в лунки добавляют окрашивающий субстрат ОФД - ортофенилендиамин (III фаза). Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя серную кислоту. Для контроля ставят такие же пробы с положительным и заведомо отрицательной сыворотками.Учет результатов анализа проводят с помощью фотометра, который определяет оптическую плотность в двухволновом режиме (492 нм и 620 нм). Для постановки реакции ензиммичених антител, кроме фотометра, нужны одно-и восьмиканальные автоматические пипетки с полипропиленовым наконечником и соответствующие наборы диагностических тест-систем.Метод ИФА находит широкое применение в серологической диагностике сифилиса. Он одинаково эффективен для выявления болезни в инкубационном периоде (через 1-2 недели после инфицирования), при клинических проявлениях болезни и скрытых его формах. Очень часто ИФА используют при скрининговых обследованиях населения, особенно на станциях переливания крови.В лабораторной практике иногда применяют также реакцию иммунной прилипания (РИП) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Первая из них основывается на том, что патогенные тестикулярные трепонемы штамма Никольса при смешивании с сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов человека прилипают к поверхности красных кровяных телец. РНГА достаточно широко используется для диагностики сифилиса благодаря своей методической простоте. Она становится положительной уже через три недели после заражения. Положительный результат реакции остается годами после выздоровления. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).

Мир микроорганизмов чрезвычайно разнообразен и систематизирован учёными-исследователями. Изучение живого микромира активно велось в прошлом столетии. Однако, многие болезни до конца не изучены и в нынешнем веке.

Так, например, до сих пор не существует единого мнения по поводу происхождения сифилиса. Эта «французская болезнь», как наиболее древнее инфекционное заболевание человечества, по утверждению М. В. Милича, возникла на Земле одновременно с появлением человека.

К слову, М.В. Милич - ведущий сифилидолог страны периода 60-80-х годов, автора многочисленных книг и монографий, посвященных сифилису.

Официально открытие возбудителя сифилиса относится к 1905 году. Немецкие микробиологи Ф. Шаудин и Э. Гофман определили ряд морфологических, культуральных, биохимических свойств бледной трепонемы, а также некоторые особенности данного микроорганизма, положенные в основу таксономии.

В данной статье подробно разберем особенности строения, антигенную структуру, биохимические и физиологические свойства инфекционного агента, вызывающего сифилис.

Итак, единственным возбудителем сифилиса человека является Treponema pallidum (бледная трепонема). Она относится к порядку Spirochaetales типа Spirochaetes.

Показать всё

1. Морфология Treponema pallidum

Клетки бледных трепонем имеют длину 6-15 мкм, ширину 0,1-0,2 мкм, представляют собой протоплазматический цилиндр (цитоплазма, окружённая цитоплазматической мембраной), скрученный в спираль. Иногда клетка микроорганизма напоминает штопорообразную тонкую нить.



Рисунок 1 - Строение бледной трепонемы. OM, наружная мембрана; Ef (эндофлагелла или периплазматические жгутики); LP 1, 2, липопротеины; Pg - пептидогликан; CM - цитоплазматическая мембрана. (Из Cox DL, Chang P, McDowall AW и Radolf JD: Наружная мембрана, а не оболочка белков хозяина, ограничивает антигенность вирулентной трепонемы паллидум. Infect Immun 60: 1076)

Число завитков - от 8 до 14 штук. Завитки, одинаковые по размерам, сохраняются при любых движениях клетки, даже при движении трепонемы вдоль или между других клеток, например, форменных элементов крови.



Рисунок 2 - Электронная микрофотография Treponema pallidum. (From Fitzgerald TJ, Cleveland P, Johnson RC et al: Сканирующая электронная микроскопия Treponema pallidum (штамм Nichols), прикрепленная к культивируемым клеткам млекопитающих. J Bacteriol 130: 1333, 1977.)

С полюсов клетки, между оболочкой и цитоплазмой располагаются фибриллы. Одна часть фибриллы зафиксирована, вторая часть остаётся свободной. Фибриллы образуют двигательный аппарат трепонемы паллидум, позволяющий осуществлять несколько типов движения в жидкой среде:

1. 1 Перемещение.
2. 2 Вращение вдоль оси.
3. 3 Сгибание.

Treponema pallidum является грамотрицательным микроорганизмом. Однако, по Грамму не окрашивается, так как имеет в своём составе гидрофобные частицы, не восприимчивые к анилиновым красителям.

При окраске по Романовскому-Гимзе приобретает слабо – розовый цвет. Эта особенность послужила основанием для видового названия возбудителя сифилиса.

Treponema pallidum subsp pallidum - это требовательный к условиям окружающей среды микроорганизм, который имеет узкие оптимальные диапазоны pH (7,2-7,4), Eh (-230-240 мВ) и температуру (30-37°C). Трепонемы быстро инактивируются слабым теплом, холодом, высушиванием и большинством дезинфицирующих средств.

Традиционно трепонемы паллидум считались строгими анаэробами, но теперь они известны как микроаэрофильные бактерии.

2. Культуральные и биохимические свойства

Несмотря на интенсивные усилия в течение последних 75 лет, T pallidum pallidum не были успешно культивированы in vitro. Жизнеспособные микроорганизмы могут сохраняться в течение 18-21 дней в комплексных средах, а ограниченная репликация была получена совместным культивированием с клетками культуры ткани. Другие три патогенных вида трепонем также не были успешно выращены in vitro.

При культивации бледная трепонема теряет свою патогенность, но, тем не менее, сохраняет некоторые антигенные свойства (эту особенность используют для постановки реакции Вассермана).

Культуру, в основном, культивируют в тестикулах кроликов. В ткани тестикул трепонема паллидум размножается, вызывая орхит у многострадальных животных.

Размножается Т. pallidum бинарным поперечным делением при температуре около 37˚С. Время генерации in vivo относительно велико (30 часов).

Трепонемы малоустойчивы во внешней среде.

1. 1 Вне человеческого организма живут несколько минут, после высыхания погибают. Так, при температуре 40˚С трепонемы погибают в течение нескольких часов, при температуре свыше 50˚С - в течение 15 минут.
2. 2 При неблагоприятных условиях микроорганизм образует L–формы, а также цисты, которые, в свою очередь, способны, к образованию вновь спиралевидных форм.

По типу метаболизма Т. pallidum является хемоорганогетеротрофом. Это означает, что в качестве источника энергии для жизнедеятельности бледная трепонема использует органические вещества и энергию химических связей.

Ввиду неспособности к существованию Т. pallidum in vitro биохимические свойства изучены не достаточно хорошо.

3. Антигенная структура

Т. pallidum имеет мало изученную антигенную структуру. Она представлена специфическим термолабильным протеиновым антигеном, неспецифическим липоидным антигеном, а также антигеном полисахаридной природы.

Проще говоря, антигены бледной трепонемы – это преимущественно белки, липиды и полисахариды наружной мембраны клетки.

Важную роль играет липополисахарид (ЛПС) клеточной стенки бактерии. Он выполняет антигенную и токсическую функции, являясь эндотоксином бледной трепонемы.

Липоидный антиген сходен с тканевым экстрактом бычьего сердца – кардиолипином.

4. Факторы патогенности

Как и биохимические свойства, факторы патогенности трепонем изучены не достаточно хорошо.

После попадания в макроорганизм Т. pallidum высвобождает специфические белки, липополипротеины и липополисахариды, проявляющие токсические свойства после ее гибели.

Липополипротеины участвуют в активации иммунной системы, а протеины сходны по отдельным свойствам с бактериальными гемолизинами.

К факторам патогенности бледной трепонемы относят способность высвобождать эндотоксины и липидные антигены по все видимости, из липидов митохондриальных мембран, обладающие свойством аутоантигенов.

Т. pallidum, являясь грамотрицательной бактерией, не продуцирует экзотоксины, однако обладает токсической активностью в отношении некоторых клеток, например, нейробластов.

5. Виды иммунитета

В ответ на внедрение возбудителя сифилиса в организм человека возникает клеточный и гуморальный иммунный ответ.

Клеточный иммунитет связан с фиксацией бледной трепонемы к клеткам органов и тканей и последующей активацией макрофагов, Т-лимфоцитов. При этом из организма человека возбудитель сифилиса не элиминируется.

Гуморальный иммунитет характеризуется образованием специфических иммуноглобулинов. На ранних этапах инфекции в организме человека образуются IgM. По мере прогрессирования инфекции активируется синтез IgG. IgA синтезируется в малых количествах. Вопросы участия и синтеза IgD и IgE не достаточно хорошо изучены.

6. Чувствительность к антибактериальным препаратам

Возбудитель сифилиса чувствителен практически ко всем антибиотикам, но к препаратам выбора относятся пенициллины.

В основе клеточной стенки бледной трепонемы лежит пептидогликан, выполняющий защитную функцию. Этот пептидогликан является «мишенью» для основного антибактериального препарата, предназначенного для лечения сифилиса – пенициллина. Антибиотики группы пенициллинов разрывают тетрапептидные связи пептидогликана.

При воздействии антибиотика на растущую бледную трепонему (возможно, при длительном воздействии) образуется L-форма бактерии. Такая форма лишена клеточной стенки, но всё ещё способна к размножению.

Определение чувствительности бледной трепонемы к антибактериальным препаратам не проводится.

7. Лабораторная диагностика сифилиса

Лабораторные методы диагностики сифилиса условно можно разделить на 2 группы:

1. 1 Выявление самого возбудителя заболевания из биологических препаратов (содержимое шанкра, гнойное отделяемое папул, пунктаты из лимфатических узлов).
2. 2 Серологические реакции.

Серологические реакции используются как для верификации диагноза, так и для оценки эффективности терапии сифилиса. Особенность серологии сифилиса сводится к отсутствию положительных результатов анализов на раннем этапе заболевания.

Объясняется это достаточно просто. Так, инкубационный период сифилиса в среднем составляет 3-5 недель. Было замечено, что у асоциальных лиц, злоупотребляющих спиртным, а также у лиц с туберкулёзом и ВИЧ-инфекцией инкубационный период отличается от средних показателей в сторону уменьшения (2 недели).

Инкубационный период увеличивается на фоне приёма различных антибактериальных препаратов (до 6 месяцев).

На протяжении этого времени концентрация антител не успевает достигнуть диагностического титра. Однако, у инфицированного человека могут присутствовать клинические симптомы. Такой сифилис называется серонегативным.

Серопозитивным называют сифилис с яркой клинической картиной и присутствием в крови диагностического титра антитела (то есть положительный результат серологических реакций). При отсутствии лечения серопозитивный сифилис перетекает во вторичный сифилис, длящийся несколько лет.

8. Выявление T. pallidum в субстрате

8.1. Методика исследования Т. pallidum в «тёмном поле»

Популярным методом диагностики является обнаружение бледной трепонемы в тёмном поле микроскопа. Этот метод позволяет наблюдать за трепонемой, учитывать особенности её морфологии и движения.

Материал для исследования забирают с твердого шанкра или с эрозий гранулём и папул. Осторожно захватывают предварительно очищенный материал петлей, смешивают с каплей физиологического раствора и наносят на предметное стекло.

Живой материал изучают в тёмном поле микроскопа. Для этого применяют специальный конденсор, позволяющий изучать трепонему «во всей красе».

8.2. Микроскопия мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе

Для исследования фиксированных (сухих) мазков используется метод окрашивания по Романовскому-Гимзе. При таком окрашивании другие виды трепонем приобретают фиолетовый оттенок, а Т. pallidum - бледно-розовый цвет.

Остальные методы исследования, такие как способ Бури, серебрение по Морозову, простой фуксиновый метод и др., не получили широкого практического применения, ввиду малой информативности.

9. Серодиагностика

Выявление антител к бледной трепонеме проводится для:

1. 1 Подтверждения клинического диагноза сифилиса;
2. 2 Установления диагноза скрытого сифилиса;
3. 3 Контроля за эффективностью проводимого лечения;
4. 4 Подтверждения выздоровления больных сифилисом;
5. 5 Профилактика сифилиса и диспансеризация населения (исследование крови определённых категорий людей, например, относящихся к группам риска).

Современные методы серодиагностики основаны на выявлении специфических и неспецифических антител разных классов.

9.1. Неспецифические серологические реакции

Лабораторное исследование крови проводится на предмет обнаружения противолипидных антител.

• Реакция Вассермана (РВ, RW)

Является классической неспецифической реакцией. В её основе лежит принцип связывания комплемента. Проводится реакция с двумя-тремя антигенами. Исполняется как для количественного, так и для качественного определения неспецифических антител.

RW ставится с кардиолипиновым и трепонемным антигеном. Последний позволяет повысить специфичность реакции и оценить состояние иммунитета больного.

При первичном сифилисе RW имеет положительное значение в конце инкубационного периода, т.е. через примерно 4 недели от начала заболевания.

При исследовании больных вторичным сифилисом положительная RW выявляется у 100% больных и у 75% больных в стадии третичного сифилиса.

Нередко, RW даёт ложноположительные результаты. Они имеют место быть при следующих физиологических состояниях:

1. 1 При других инфекциях, вызванных вирусами, бактериями, простейшими;
2. 2 При злокачественных опухолевых процессах;
3. 3 При коллагенозах;
4. 4 При беременности на поздних сроках (после 30 недели) и после родов;
5. 5 У здоровых лиц, употребляющих спиртные напитки, а также после приёма жирной пищи.
• Реакции, основанные на агглютинации кардиолипина (MP - RPR, VDRL)

Эти реакции являются методом экспресс-диагностики сифилиса. По своему существу, это микрореакции, проводимые с плазмой крови (наиболее чувствительный метод) и инактивированной сывороткой (второй по чувствительности).

Они проводятся капельным способом и требуют использование специального антигена. Этот метод серодиагностики проводится для отбора положительных проб с дальнейшим исследованием лиц с помощью специфических реакций.

9.2. Специфическая серодиагностика

В основе диагностики представлены различные методы обнаружения специфических антител.

9.2.1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Занимает срединное положение из всех специфических методов серодиагностики. Реакция основана на принципах идентификации методом люминесцентной микроскопии флюоресцирующего комплекса, связанного с иммуноглобулином организма человека на поверхности клетки-патогена.

Флюоресцирующий комплекс состоит из человеческого глобулина и флюоресцеин тиоизоционата. Существует несколько модификаций этой реакции:

1. 1 Реакция иммунофлюоресценции с адсорбцией;
2. 2 Реакция IgМ – РИФ с адсорбцией.

9.2.2. Реакция иммобилизации Treponema pallidum (РИБТ)

Реакция РИБТ основана на особенности заражённой сыворотки крови людей обездвиживать бледные трепонемы.

В общих чертах методику можно объяснить так: в кровь больного добавляют антиген, приготовленный из сифиломы кролика и комплемент.

Иммобилизирующие антитела - это поздние антитела. Своего максимума они достигают к концу первого года болезни. Этот метод не применяется при первичном серонегативном сифилисе, считается наиболее трудоёмким.

9.2.3. Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA)

Данный метод диагностики автоматизирован. По чувствительности и специфичности сходен с реакцией иммунофлюоресценции с адсорбцией.

9.2.4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

На фоне других серологических исследований, РНГА отличается более высокой чувствительностью и специфичностью, особенно при использовании высококачественного антигена.

Принцип реакции основан на агглютинации эритроцитов, несущих на своей поверхности антигены бледной трепонемы, если к ним добавить специфические антитела. Результат РПГА будет положительным уже в конце инкубационного периода, т. е. через 3-4 недели.

Учитывая все особенности возбудителя сифилиса, можно выделить мероприятия, направленные на защиту здорового человека от заражения сифилисом.

Так как заболевание передаётся половым и контактным (бытовой сифилис) путями, стоит знать, что эффективными способами защиты являются барьерная контрацепция и соблюдение общих правил гигиены.

Общая характеристика спирохет.

Спирохетозы – это группа инфекционных заболеваний, вызываемых спиралевидными бактериями, характеризующиеся общей интоксикацией и видовой цикличностью развития.

Таксономия:

Порядок: Spirochaetales (от греч. speira – завиток, chaite - волос)

Семейство: Spirochaetaceae, Leptospiraceae

Род: Spirochaeta Leptospira

Морфология: длинные, тонкие, спирально-изогнутые микроорганизмы, размеры 0,1-0,3х5-250 мкм. Центральной структурой является протоплазматический цилиндр, в котором содержатся цитоплазма, нуклеоид, рибосомы 70 S и ферменты окружен цитоплазматической мембраной и клеточной стенкой. Протоплазматический цилиндр имеет постоянную спиралевидную форму, благодаря пептидогликану, образуя первичные завитки. Их число, тип, шаг, угол наклона варьируют у разных видов. Вторичные завитки в результате изгиба всего тела. Вокруг спиралевидного цитоплазматического цилиндра располагается периплазматический жгутик (жгутики), один конец его прикреплен к одному из полюсов протоплазматического цилиндра, а другой – к последнему примерно посередине клетки, количество жгутиков от 2-100 (одна половина прикреплена к одному полюсу, а вторая – к другому полюсу). Периплазматические жгутики спирально обвивают протоплазматический цилиндр, образуя осевую нить, поверх которой располагается многослойная наружная мембрана (наружная оболочка спирохеты); жгутик расположен между ней и цилиндром (периплазматический жгутик или эндожгутик).

Отличия от энзожгутиков:

постоянно обвиваются вокруг тела клетки;

полностью расположены внутри клетки;

сокращаются вращением вокруг своей оси, поступательно и сгибательно;

сохраняют подвижность в среде с относительно высокой вязкостью.

Спор и капсул не образуют. При неблагоприятных условиях образуют цисты в результате сворачивания в клубок.

Тинкториальные свойства: плохо окрашиваются анименовыми красителями, кроме боррелий, грамотрицательные, применяют метод серебрения по Морозову.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, необходимо добавлять нативный белок, углеводы, жирные кислоты. По способу запасания энергии различают анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы и аэробы. Оптимальная температура для лептоспир и боррелий 28-30 ?C.

Биохимические свойства : каталаза-, уреаза-, оксидаза- отрицательные, реакция Фойгеса-Проскауэра “-”, не восстанавливают нитраты.

Резистентность: зависит от рода и вида.

Роль в патологии .

Трепонемы являются возбудителями сифилиса, фрамбезии, пинты, беджеля;

Боррелии – эпидемического и эндемического клещевого возвратного тифов, лайм-боррелиоза;

Лептоспиры – лептоспирозов.

Общие признаки спирохетозов:

циклическое течение;

обнаружение возбудителя в крови и тканях;

основные методы микробиологической диагностики: бактериоскопический и серологический.

2. Микробиология сифилиса.

Сифилис - хроническое инфекционное венерическое заболевание, характеризующееся волнообразным течением, чередованием периодов активности клинического проявления болезни с длительными латентными периодами.

История открытия.

Возбудитель сифилиса выявлен в 1905 году Шаудином и Гоффманом и назван бледной спирохетой. Вассерман, совместно с Кейссером и Бруком предложил серологическую реакцию для диагностики сифилиса.

Таксономия.

Порядок Spirochaetales

Семейство: Spirochaetaceae

Род: Тreponema

Вид: Тreponema pallidum

Морфология: спиралевидные бактерии размером 6-14х0,2-0,3 мкм, число первичных завитков от 8 до 12, расположенные на равном расстоянии друг от друга; от концов клетки отходят три периплазматических жгутика. Спор и капсул не образуют, но в организме экспериментальных животных могут синтезировать мукополисахаридной природы капсулоподобный чехол. При неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты, зернистые и кистоподобные сферические тела.

Тинкториальные свойства: плохо окрашиваются анилиновыми красителями, граммоотрицательны, по Романовскому-Гимзе – в слабо-розовый цвет (pallidum – бледная), осуществляют метод серебрения по Морозову и негативное контраститрование по Бурри, наиболее эффективное изучение в темнопольном или или фазовоконтрастном микроскопе.

Культуральные свойства : облигатные анаэробы, хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура - 35°C, при температуре выше 40°C теряют жизнеспособность. Очень требовательны к питательным средам; необходимо добавление почечной, мозговой ткани или асцитической жидкости. Выросшие на питательных средах трепонемы (“культуральные” штаммы) становятся более грубыми, короткими, полиморфными, утрачивают иммуногенность и патогенность. Трепонемы хорошо растут, не теряя своих иммунногеных и патогенных свойств в тестикулах кроликов, в куриных эмбрионах – “тканевые” штаммы, что используется для выделения и изучения возбудителя от больных.

Биохимические свойства : малоактивны, разлагают глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты; образуют индол и сероводород, разжижают желатин; восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает тканям черную или темно-коричневую окраску.

Антигенная структура : сложная, белки наружной мембраны (термолабильные, разрушающиеся при 76-80°C, полисахариды (термостабильные); липопротеиды, являющиеся перекрестно-реагирующими антигенами, общими для человека и крупного рогатого скота, например, кардиолипиновый антиген – это экстракт липопротеидов из сердца быка, используется в серологических реакциях в диагностике.

Факторы патогенности :

а) токсины:

Эндотоксин (ЛПС клеточной стенки);

б) ферменты патогенности не выявлены;

в) структурные и химические компоненты клетки:

подвижность за счет жгутиков;

адгезины;

белки наружной мембраны.

Резистентность: чувствительны к воздействию факторов внешней среды, УФЛ, высушиванию, высоким температурам (при 40°C в течение 1 часа теряют патогенные свойства, при 48°C погибают через 10 мин); дез. растворы в рабочих концентрациях оказывают губительное действие; выдерживают низкие температуры (на холоде сохраняются до 50 суток, при замораживании до 1 года), в цельной крови и сыворотке при 4°C остаются жизнеспособными в течение 24 часов; чувствительны к солям тяжелых металлов и антибиотикам (пенициллин, эритромицин, карбенициллн и др.)

Эпидемиология.

Источник инфекции – больной человек. Бактерионосительства при сифилисе не бывает.

Путь передачи:

1)контактный: а) прямой; б) непрямой.

2) трансплацентарный (от матери новорожденному);

3) трансфузионный.

Входные ворота: слизистые оболочки половых органов, ротовой полости и т.д., кожа с нарушением целостности.

Роль и патологии

Сифилисом болеют только люди. Экспериментально можно заразить обезьян, кроликов, хомяков. У обезьян образуется твердый шанкр, у кроликов и хомяков – генерализованная хроническая инфекция.

Cифилис
инфекционное венерическое заболевание, вызываемое Treponema pallidum , характеризующийся поражением кожи, внутренних органов, костей, нервной системы. Бывает приобретенный и врожденный сифилис.

Cифилис. Таксономия.
Бледная трепонема, относится к семейству Spirochaetaceae , отделу Gracilicutes .

Cифилис. Морфология.
Низкая способность к окраске. Тонкая бактерия спиралевидной формы, длиной от 4-14 мкм, с равномерными мелкими завитками, чрезвычайно подвижна. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в слабо-розовый цвет.

Cифилис. Культивирование.
Облигатный анаэроб, плохо растет на спец. пит средах.

Cифилис. Антигенная структура.
Характеризуется Антигенными связями с др. трипонемами, а также липоидами тканей животных и человека. Установлено несколько АГ у возбудителя, один из кот. Липоидный АГ – идентичен липоидному экстракту бычьего сердца.

Cифилис. Резистентность.
Слабоустойчива в окружающей среде, при 55 гибнет в теч 15 мин, чувствительна к высыханию, свету, солям ртути, висмуту, мышьяку, пенициллину. На бытовых предметах сохраняется до высыхания, хорошо сохраняется в ткани трупа.

Cифилис. Эпидемиология.
Источник инфекции больной человек. Заражение половым путем, редко через бытовые предметы, возможно заражение через поцелуи, молоко кормящей матери, при переливании крови.

Cифилис. Патогенез и клиника.
Проникает в организм через кожу или слизистую, распространяется по органам и тканям, вызывая их поражение. Инкубационный период 3-4 нед. После инкубационного периода протекает циклически в виде первичного, вторичного и третичного периодов.

В месте внедрения (на половых органах, губе) появляется первичное поражение – твердый шанкр – уплотнение с язвой на поверхности.

Вторичный период длится 3-4 года, характеризуется сыпью, нарушением общего состояния организма.
Третичный период – поражение кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей, нервной системы, появляются образования, склонные к распаду, изъявлению.

Cифилис. Иммунитет.
Развивается нестерильный, после излечения он не сохраняется, возможны повторные заболевания.

Cифилис. Лабораторная диагностика.
Применяют микроскопию в темном поле. К концу 1 и 2 периодов становятся положит серологические рекции Вассермана, осадочные реакции Кана. При массовых обследованиях применяют микрореакцию на стекле с каплей крови и спец АГ. Также исп иммобилизацию.

Cифилис. Лечение.
Антибиотики пенициллинового ряда и препараты висмута, йода.

Cифилис. Профилактика.
Специфическая отсутствует. Неспецифическая: соблюдение правил гигиены, предохранение во время полового акта, проведение комплекса санитарно-гигиенических мероприятий общего характера.

Микробиологическая диагностика сифилиса

Практическая работа

Медицина и ветеринария

Название «бледная» трепонема получила из-за низкой способности к окраске. Существуют другие патогенные трепонемы: Т. pertenue - возбудитель фрамбезии, Т. carateum - возбудитель пинты, Т. bejel - возбудитель хронического генерализованного спирохетоза (беджель). Указанные возбудители и вызываемые...

Методические указания для студентов к практическому занятию № 36.

Тема занятия:

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики сифилиса.

Модуль 2 . Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Тема 36: Микробиологическая диагностика сифилиса.

Актуальность темы:

Возбудитель сифилиса

Сифилис - инфекционное венерическое заболевание, вызываемое Treponema pallidum, характеризующееся поражением кожи, внутренних органов, костей, нервной системы. Различают приобретенный и врожденный сифилис.

Таксономия. Возбудитель сифилиса - бледная трепонема (Treрonema pallidum) - открыт в 1905 г. Ф. Шаудинном и Э. Гоффманом; относится к семейству Spirochaetaceae, отделу Gracilicutes.

Морфология и тинкториальные свойства. Название «бледная» трепонема получила из-за низкой способности к окраске. Существуют другие патогенные трепонемы: Т. pertenue - возбудитель фрамбезии, Т. carateum - возбудитель пинты, Т. bejel - возбудитель хронического генерализованного спирохетоза (беджель). Указанные возбудители и вызываемые ими болезни чаще встречаются в регионах с жарким и влажным климатом. Бледная трепонема - тонкая бактерия спиралевидной формы, длиной от 4 до 14 мкм, с равномерными мелкими завитками (8-14 завитков); наряду со спиралевидной может иметь другие формы - в виде цист, гранул, L-форм; окрашивается по Романовскому-Гимзе в характерный слабо-розовый цвет. Движения от винтообразных до сгибательных.

Культивирование. Бледная трепонема - облигатный анаэроб, чрезвычайно прихотлива к питательным средам. Культивируемая на питательных средах трепонема - культуральная спирохета - отличается от патогенной меньшей вирулентностью, однако их антигены сходны, что используется при серодиагностике сифилиса.

Антигенная структура. Бледная трепонема характеризуется антигенными связями с другими трепонемами, а также липоидами тканей животных и человека. Установлено несколько антигенов у возбудителя, один из которых - липоидный антиген - идентичен липоидному экстракту бычьего сердца.

Резистентность. В окружающей среде бледная трепонема слабоустойчива; при 55 0 С гибнет в течение 15 мин, чувствительна к высыханию, свету, солям ртути, висмуту, мышьяку, пенициллину. На предметах домашнего обихода сохраняет заразительность до момента высыхания; хорошо сохраняется в ткани трупа.

Восприимчивость животных. Экспериментально патологический процесс можно вызвать в яичке и на коже кроликов, в коже у человекообразных обезьян.

Эпидемиология. Источник инфекции - больной человек. Заражение происходит преимущественно половым путем, редко - через предметы домашнего обихода (стаканы, зубные щетки, папиросы и др.), загрязненные отделяемым от больного; возможно заражение через поцелуи, молоко кормящей матери (бытовой сифилис), не исключены случаи заражения при переливании крови от доноров, больных сифилисом.

Патогенез и клиническая картина. Возбудитель сифилиса проникает в организм через кожу или слизистую оболочку, распространяется по органам и тканям, вызывая их поражение. Инкубационный период длится в среднем 3-4 нед. После инкубационного периода сифилис протекает циклически в виде первичного, вторичного и третичного периодов. В месте внедрения возбудителя (на половых органах, в ротовой полости и т.д.) появляется первичное поражение - твердый шанкр - резко отграниченное уплотнение с язвой на поверхности. Вторичный период сифилиса длится 3-4 года, характеризуется сыпью, нарушением общего состояния организма. Третичный период характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей, нервной системы: появляются образования, склонные к распаду, изъязвлению.

Иммунитет. Врожденного иммунитета к сифилису не существует. При сифилисе развивается нестерильный иммунитет; после излечения иммунитет не сохраняется, поэтому возможны повторные заболевания.

Для обнаружения бледной трепонемы в отделяемом твердого шанкра применяют микроскопию в темном поле. К концу первичного и во вторичном периоде становятся положительными сергологические реакции Вассермана, осадочные реакции Кана, цитохолевая и другие пробы, выявляющие антитела к бледной трепонеме. При массовых обследованиях применяют отборочную реакцию, или микрореакцию на стекле, с каплей крови или сыворотки и специальным антигеном. В исследовательских лабораториях используют также реакцию иммобилизации трепонем и другие современные методы.

Схема микробиологического исследования при сифилисе

Микроскопическое исследование Серодиагностика

(комплекс серологических реакций):

Реакция Вассермана

Реакция иммобилизации трепонем

Микроскопия нативного препарата РИФ

В темном поле

ОТВЕТ ОТВЕТ

Лечение. Наиболее эффективными антимикробными средствами являются антибиотики пенициллинового ряда. Применяют также препараты висмута, йода и др.

Профилактика. Специфическая профилактика отсутствует. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении правил гигиены, а также в проведении комплекса санитарно-гигиенических мероприятий общественного характера: учет больных сифилисом, госпитализация всех больных заразными формами, привлечение к обследованию всех членов семьи заболевшего, систематическое обследование групп риска, воспитание населения и т. д.

Конкретные цели:

Ознакомится с морфологией возбудителя сифилиса.

Определить особенности клинического течения сифилиса.

Определить понятия «тканевые» и «культуральные» трепонемы.

Трактовать результаты микроскопического исследования.

Изучить методы серологической диагностики сифилиса.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.

Уметь:

• Забирать материал для исследования от больных
• Трактовать результаты микроскопического исследования
• Уметь проводить реакцию Вассермана

Теоретические вопросы:

1. Возбудитель.

• Свойства. Резистентность.
• Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
• Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
• Микробиологическая диагностика.
• Специфическая профилактика и лечение

2. Цели постановки реакции Вассермана.

3. Диагностическая ценность реакции Вассермана и осадочных реакций.

4. Механизм реакции Вассермана.

5. Особенности иммунитета при сифилисе.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

• Микроскопия демонстрационных препаратов.
• Зарисовка демонстрационных микропрепаратов в протокол.
• Разбор схемы лабораторной диагностики.
• Оформление протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и ви-русология /Учебник для медицинских ВУЗов, Ст-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,- 512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.

4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. /Под ред. М.П. Зыкова.- М. «Медицина». 1977.– 288с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес.– М.: Медицина, 1986.– 512с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология.- Алма-Ата.: «Ка-захстан», 1974.– 372с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов.– Мн.: Выш. шк., 1986.– 255с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

• Самостоятельная работа.
• постановка реакции Вассермана.
• Учет реакции Вассермана и запись в протокол.
• Разбор и запись схем лабораторной диагностики в протокол.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п	Этапы	Время в мин.	Способы обучения	Оборудования	Место проведения
	Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию	20’	Тестовые задания выходного уровня	Таблицы. Тесты по теме.	Учебная комната
	Самостоятель-ная работа	35’	Граф логичной структуры	Коллекция демонстрационных препаратов, биопрепаратов.
	Самоконтроль и коррекция усвоенного материала	15’	Целевые обучающие программы
	Тестовый контроль	15’	Тесты
	Анализ резуль-татов работы

Алгоритм лабораторной работы:

Изучение схемы лабораторной диагностики сифилиса.

Микроскопия готовых мазков из культуральных и тканевых трепонем.

Ознакомление с правилами забора материала от больных для микроскопии исследуемого материала.

Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.

Зарисовка препаратов в протокол.

Запись схем лабораторной диагностики в протокол.

Оформление протокола.

Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

Целевые обучающие задания:

1. В КВД поступил больной с диагнозом «первичный сифилис». Какой из перечисленных методов диагностики используют на данной стадии заболевания?

A . темнопольная микроскопия;

C . РП в геле

D . РА

E . непрямая иммунофлюоресценция

2. У больного отделения челюстно-лицевой хирургии при постановке реакции Вассермана она оказалась отрицательной. По каким из перечисленных результатов определяют феномен отрицательной РСК?

A . по агглютинации эритроцитов;

B . по наличию осадка эритроцитов;

C . по изменению цвета жидкости;

D . по образованию пленки

E . по наличию гемолиза в пробирках.

3. При обследовании больного КВД была выявлена папулезно-розеолезные высыпания на туловище и конечностях и увеличение лимфатических узлов. Предварительно установленный диагноз «сифилис». Каким методом лабораторной диагностики этот диагноз может быть подтвержден?

A . аллергическим;

B . биологическим;

C . бактериологическим;

D . бактериоскопическим;

E . ИФА

4. Во время приема врач-стоматолог обнаружил у больного в ротовой полости твердый шанкр. Какой из перечисленных методов лабораторной диагностики можно применить для постановки диагноза?

A . реакция иммобилизации трепонем

B . реакция Вассермана

C . реакция Кана

D . РА

E . бактериоскопический

5. В женскую консультацию пришла женщина на 8 неделе беременности. При обследовании у нее взяли кровь для проверки на наличие специфических антител к трепонемам. Какая из перечисленных ниже серологических реакций может быть использована для выявления антител к трепонемам?

A . реакция Райта

B . реакция Вассермана

C . реакция Видаля

D . реакция Борде-Жангу

E . РТГА.

6. Для подтверждения диагноза «сифилис» лаборант проводил серологическую реакцию, в которой использовал сыворотку крови больного, кардиолипидный антиген, комплемент и индикаторную систему. Как называется поставленная реакция?

A . реакция иммобилизации трепонем;

B . реакция Вассермана;

C . реакция Кана

D . РП

E . реакция иммунофлюоресценции.

7. При проведении серологической реакции на обнаружение антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови больного провели инкубацию трепонем с сывороткой пациента в анаэробных условиях, после чего бактерии потеряли подвижность. Какая реакция была поставлена и что она означает?

A . реакция Вассермана, пациент болен сифилисом;

B .реакция Вассермана, у пациента идет инкубационный период;

C . реакция иммобилизации трепонем, пациент болен сифилисом;

D . реакция непрямой иммунофлюоресценции, пациент болен сифилисом;

E . реакция иммобилизации трепонем, пациент когда–то перенес сифилис.

8. Для серологической диагностики сифилиса с использованием реакции Вассермана врач-лаборант подготовил такие реактивы: кардиолипидный антиген, изотонический раствор натрия хлорида, гемолитическую систему. Какой еще компонент необходим для постановки этой реакции?

A . живые трепонемы;

B . эритроциты барана;

C . комплемент;

D . антиглобулиновая сыворотка;

E . диагностическая преципитирующая сыворотка.

9. В микропрепарате, приготовленном из пунктата лимфатических узлов больного, окрашенном по Романовскому-Гимзе, врач выявил тонкие микроорганизмы с 12-14 равномерными завитками бледно-розового цвета. Про возбудителя какого инфекционного заболевания может идти речь в данном случае?

A . возвратный тиф;

B . лептоспироз;

C . лейшманиоз

D . сифилис

E . трипаносомоз.

10. У больного с подозрением на первичный сифилис был взят соскоб со слизистой ротовой полости. При микроскопии мазка окрашенного по методу Романовского-Гимзе были выявлены извитые бактерии фиолетового цвета. Какой из нижеуказанных выводов является верным?

A . у пациента выявлена T . pallidum ;

B . у пациента обнаружены атипичные формы T . pallidum ;

C . у пациента выявлены непатогенные трепонемы;

D . был выбран неправильный метод окраски;

E . -

11. Врач-клиницист заподозрил у пациента первичный сифилис. Какой материал для исследований целесообразно забрать для подтверждения диагноза?

A . тканевую жидкость из твердого шанкра и пунктат лимфатических узлов;

B . соскоб из кожных высыпаний;

C . ликвор;

D . слизь из носа

E . слюну.

12. У больного с подозрением на вторичный сифилис на исследование была взята кровь. Какой метод диагностики целесообразно применить для подтверждения диагноза?

A . реакцию Видаля;

B . аллергическую пробу;

D . реакцию Борде-Жангу

E . бактериологический метод

C . реакцию непрямой иммунофлюоресценции .

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать
68128.		Слова в вірші – і рай в душі	78.5 KB
	Мета: поглибити учнівські знання з теорії літератури ідейнохудожнього аналізу поетичного твору удосконалювати вміння виразного читання; розвивати поетичне мислення образну уяву; виховувати любов до художнього слова та до рідної природи. Я зачитуватиму поетичні рядки а ви повинні підставити...
68129.		Інтелектуальна гра «Літературна веселка» Ти завжди в серцях людей, Тарасе!	43.5 KB
	Шевченка розвивати логічне мислення виразне читання виховувати повагу до Шевченкового слова та цікавість до вивчення його творчості. Тарас Шевченко Тарас Це бунтівне пророче імя знайоме не тільки українцям а й усьому світові. Шевченко це криниця з джерельною водою яка втамовує духовну спрагу народу.
68130.		Знайомство з країною Логікою	28.5 KB
	Сьогодні діти ми відправляємось у незвичайну подорож. Діти ходять до школи найкоротшим шляхом але можуть годинами блукати різноманітними лабіринтами. Діти імітують посадку на автобус і їзду. Ось компанія яка У якій послідовності сидять діти Боря Петрик Юрко Віра Стас Іра.
68131.		Аналогія. Добір малюнків за аналогією	263.5 KB
	Тип уроку: урок засвоєння умінь і навичок Обладнання: геометричні фігури і предметні малюнки до гри Фотограф; індивідуальні набори геометричних фігур гралото малюнки з послідовністю. Міняю місцями фігури деякі взагалі прибираю. Всі фігури різного кольору А тепер відкрийте очі подивіться...
68132.		Подорож по океану логічних завдань	27.5 KB
	Мета: Познайомити дітей з різними поняттями; розвивати мислення, мову, пам’ять, спостережливість; виховувати сміливість, рішучість. Хід уроку Повідомлення теми і мети уроку. Сьогодні ми вирушаємо у кругосвітню подорож на кораблі. Нас чекає багато різних пригод. Людина – мисляча істота. Думки словами виражає.
68133.		Сумісні та несумісні поняття. Завдання для повторення	84.5 KB
	Мета: узагальнити й систематизувати знання учнів про поняття про сумісні та несумісні поняття вдосконалювати вміння учнів розвязувати логічні завдання розвивати логічне мислення кмітливість увагу память уяву; виховувати любов до тварин пробуджувати пізнавальний інтерес до всього живого формувати самоосвітні...
68136.		МОДЕРНІЗАЦІЯ ВИЩОЇ ОСВІТИ УКРАЇНИ: МЕХАНІЗМИ ІНСТИТУЦІЙНОГО РЕГУЛЮВАННЯ	188 KB
	Результативність та ефективність функціонування системи вищої освіти України на початку ХХІ століття забезпечуватиметься тільки у випадку, коли її не зв’язуватимуть вирішенням тимчасових завдань, породжених економіко-політичною нестабільністю, демографічною кризою, соціокультурним вакуумом.