L'hémoglobine est élevée dans le sang des animaux. Détermination de la quantité d'hémoglobine

HÉMOGLOBINE

Hémoglobine (Hb)– protéine complexe (chromoprotéine) - colore les globules rouges en rouge, se compose de protéine globine et de quatre molécules hème. L'hème est la partie active et contient du fer divalent ; une molécule d'hème est capable de fixer et de donner une molécule d'oxygène. La globine est une protéine porteuse de l'hème. L'hémoglobine dans les poumons attache l'oxygène à elle-même, formant un composé fragile et facilement dissocié - l'oxyhémoglobine (HBO 2). Le sang saturé d'oxyhémoglobine (artériel) pénètre dans les tissus corporels, où l'oxyhémoglobine se décompose en hémoglobine réduite et en oxygène. L'hémoglobine réduite (désoxyhémoglobine) dans les tissus se combine avec le dioxyde de carbone, formant également le composé fragile carbhémoglobine (HbCO 2). Le sang saturé d'hémoglobine réduite et de carbhémoglobine (veineuse) pénètre dans la circulation pulmonaire. Le sang fœtal contient de l'hémoglobine fœtale (HbF), qui peut être nettement plus saturée en oxygène que l'hémoglobine maternelle. On pense que l'hémoglobine fœtale est synthétisée dans le foie et que l'hémoglobine des animaux adultes est synthétisée dans le rouge moelle. L'hémoglobine se combine facilement avec monoxyde de carbone(monoxyde de carbone), formant de la carboxyhémoglobine (HbCO), qui perd sa capacité à transporter l'oxygène. Déjà avec seulement 0,04% de monoxyde de carbone dans l'air inhalé, intoxication grave, et à une concentration de 0,1% - la mort de l'animal. En cas d'intoxication légère, le monoxyde de carbone est progressivement éliminé et l'hémoglobine retrouve sa capacité à lier et à transporter l'oxygène. Lorsque l'hémoglobine est exposée à des agents oxydants puissants (sel de Berthollet, peroxyde d'hydrogène, aniline, etc.), un composé assez fort d'hémoglobine et d'oxygène se forme - la méthémoglobine (MtHb), dans laquelle le fer divalent se transforme en forme trivalente. Ce composé retient fermement l’oxygène et ne peut pas être libéré par les tissus. Lorsqu'une grande quantité de méthémoglobine est formée, l'animal meurt par suffocation. Dans la pratique de l'élevage, la méthémoglobine se forme lors de l'alimentation des animaux avec des aliments contenant grand nombre nitrates provenant de l'introduction de fortes doses d'engrais azotés dans le sol. La détermination qualitative de l'hémoglobine et de ses dérivés peut être effectuée en utilisant analyse spectrale, et quantitatif – par diverses méthodes calorimétriques (tableau 7.).

Tableau 7. Composé de l'hémoglobine dans le sang des animaux g/l de sang

Une faible teneur en hémoglobine peut être observée en raison d'une alimentation déséquilibrée des animaux, d'une perturbation de la synthèse de l'hémoglobine, ce qui entraîne une altération significative de nombreuses fonctions corporelles.

Pour déterminer la saturation des globules rouges en hémoglobine, un indice de couleur ou indice est déterminég.

Normalement cet indicateur est 1± 0,15%

Myoglobineest une protéine complexe présente dans les muscles squelettiques et cardiaques. La myoglobine peut lier 14 à 15 % de la quantité totale d'oxygène. L'oxygène de la myoglobine est utilisé par les muscles lors de leur contraction, lorsque le flux sanguin dans leurs capillaires diminue. Lorsque les muscles se détendent, la myoglobine récupère de l'oxygène. De manière significative grandes quantités ah, la myoglobine se trouve dans les muscles des mammifères marins, ce qui leur donne la capacité longue duréeêtre sous l'eau.

Lorsque les globules rouges sont détruits, l'hémoglobine se décompose en hème et globine, une partie du fer héminique est oxydée pour former un composé spécifique, l'hémosidérine, utilisé pour la synthèse de la nouvelle hémoglobine. Le reste de l'hème est converti en pigments jaunes - bilirubine et biliverdine, qui sont ensuite excrétés dans l'urine sous forme d'urobiline et d'urochrome ou sous forme de stercobiline dans les selles.

L'hémoglobinurie bovine post-partum (Haemoglobinuria puerperalis) est une forme d'anémie hémolytique chez les vaches ; Il est généralement enregistré pendant la période de stabulation hivernale chez les vaches très productives âgées de 5 à 7 ans au cours des 5 premières semaines après le vêlage et se manifeste par des symptômes d'hémoglobinurie sévère. Cette maladie est particulièrement fréquente dans les régions où le sol manque de phosphore.

Étiologie. Les causes de l’hémoglobinurie post-partum chez les vaches n’ont pas été établies avec précision. Habituellement, son apparition est associée à des erreurs d'alimentation et d'entretien, à une hypothermie et à une intoxication du tractus gastro-intestinal. tractus intestinal, alimentation à long terme d'une vache avec de grandes quantités de luzerne, de pulpe de betterave, de betteraves et de ses feuilles avec un manque de phosphore et d'autres animaux nécessaires dans l'alimentation sels minéraux(cela arrive plus souvent après un été sec).

Pathogénèse. Une vache malade développe rapidement une hémolyse, accompagnée d'une accumulation d'hémoglobine dans le plasma. L'hémoglobine est utilisée en petites quantités dans le foie et la rate, mais la majeure partie est excrétée dans l'urine, conduisant au développement d'une hémoglobinurie chez l'animal. Par la suite, la vache développe un ictère à l’urobiline. Une diminution de la capacité du sang à absorber l'oxygène et le dioxyde de carbone due à un manque d'hémoglobine dans les globules rouges amène l'animal à manque d'oxygène et l'acidose.

Les globules rouges détruits et l'hémoglobine dissoute dans le sang deviennent pour le corps d'une vache malade substances étrangères, provoquent des manifestations de dégradation des protéines parentérales et s'accompagnent d'une augmentation de la température corporelle et de lésions des organes parenchymateux.

Le collage et la dégradation des globules rouges entraînent un blocage capillaires sanguins, avec développement ultérieur changements dégénératifs dans les tissus, notamment à la nécrose intralobulaire du foie. Dysfonctionnement hépatique, développement d'une anémie hémolytique violation grave tout le monde processus métaboliques ce qui a finalement conduit à la mort de la vache.

Changements pathologiques. Lors de l'autopsie des vaches mortes, on constate une anémie prononcée et un jaunissement des tissus. Le sang est liquide et de couleur brune. Le foie, la rate et les reins sont hypertrophiés et sont dans un état de dégénérescence graisseuse. Lors de l'ouverture du foie, on note une nécrose intralobulaire. Sur l'épicarde, il y a des hémorragies, une dégénérescence du muscle cardiaque, dans les intestins, il y a des hémorragies.

Signes cliniques. Les premiers signes d'hémoglobinurie post-partum chez la vache apparaissent parfois en lien avec l'accouchement et se manifestent par des symptômes de dépression, une fièvre modérée (39-39,8°C, parfois jusqu'à 42°C), l'appétit de la vache diminue, devient apathique, des symptômes d'hypotension du proventricule apparaît, et un dysfonctionnement des intestins se produit et une diminution de la production de lait. Après l’apparition de la maladie, après 1 à 2 jours, l’urine de la vache devient cerise foncée, transparente, sirupeuse et présente réaction alcaline. Lors de l'examen de l'urine, on y trouve des protéines, de l'hémoglobine, de l'urobiline, dans certains cas corps cétoniques, dans les sédiments - produits de dégradation des érythrocytes, des cellules épithélium rénal, parfois des cylindres rénaux. Lors des analyses de sang dans les premiers jours de la maladie, nous enregistrons forte baisse le nombre de globules rouges (jusqu'à 1,2 à 1,5 millions pour 1 mm³) et l'hémoglobine (jusqu'à 16 % selon Sali). L'indice de couleur est supérieur à un (1,15) ; la résistance osmotique des érythrocytes est réduite; L'ESR est légèrement accélérée. Dans les frottis de sang périphérique On retrouve l'anisopoikilocytose, la polychromatophilie, les réticulocytes (20 : 1000), les érythrocytes à ponctuation basophile et les normoblastes individuels. Le nombre total de leucocytes chez la plupart des vaches malades est normal ou augmente jusqu'à 15 à 20 000 pour 1 mm³. La leucoformule est caractérisée par une neutrophilie (jusqu'à 72 %) et un changement régénératif prononcé. On note une thrombocytose. À cours sévère hémoglobinurie post-partum chez les vaches, le nombre de leucocytes dans le sang diminue à 4 à 5 000 pour 1 mm³. Dans le sérum sanguin on note contenu accru bilirubine indirecte et l'apparition de méthémoglobine, une hypophosphatémie sévère et, chez certaines vaches malades, une diminution du taux de carotène et de la réserve alcaline.

Avec l'hémoglobinurie post-partum chez les vaches, une violation des indicateurs de ponction médullaire se produit. À cours aigu maladie, le nombre d'éléments nucléaires dans la moelle osseuse augmente de 20 à 30 %. L'érythroblastogramme est caractérisé par une augmentation du pourcentage de jeunes formes érythroblastiques - proérythroblastes et érythroblastes basophiles, tandis que le pourcentage de normoblastes diminue. Dans le même temps, le nombre de granulophiles est 10 fois supérieur à la normale. Simultanément aux processus de régénération dans la moelle osseuse d'une vache malade, on observe des phénomènes dégénératifs, accompagnés de poïkilocytose, d'anisocytose, de structure grumeleuse du protoplasme érythrocytaire et de pycnose des noyaux de certains érythroblastes.

Une érythropoïèse inadéquate maintient l'hémolyse des globules rouges et ralentit le processus de restauration du sang chez une vache malade.

Lors de l'examen du myélogramme, on constate une diminution des réserves disponibles de myéloblastes et de cellules réticuloendothéliales.

Lorsque la neutrophilie absolue devient relative, les neutrophiles augmentent vers la gauche et une lyse et une vacuolisation du noyau et du protoplasme sont détectées parmi les granulocytes.

Lors d'un examen clinique d'une vache malade, on constate une pâleur et un jaunissement modéré des muqueuses visibles. A la percussion on note une augmentation de la zone de matité hépatique, palpation profonde nous établissons des douleurs au foie. À l'auscultation du cœur, les bruits cardiaques s'intensifient ; à la palpation, le rythme cardiaque bat. Le pouls est accéléré - jusqu'à 100-120 battements par minute. La respiration est difficile et rapide (30 à 40 ou plus par minute). Parfois, nous sentons l'acétone dans l'air expiré. Les selles deviennent liquides, avec du mucus et ont odeur putride. Le lait de certains animaux a une couleur rougeâtre.

Couler maladie aiguë. Dans les cas graves, la maladie peut durer de 3 à 5 jours. Avec une évolution favorable de la maladie, normalisation de la composition sanguine et amélioration état général la vache malade survient dans un délai de 1 à 2 mois. Chez les vaches qui ont déjà souffert d'hémoglobinurie post-partum, la maladie peut récidiver.

Diagnostic. Le diagnostic d'hémoglobinurie post-partum chez la vache repose sur le fait que :

• La plupart des vaches très productives tombent malades dans les premières semaines après le vêlage ;
• chez les animaux malades méthodes de laboratoire on établit une anémie hémolytique avec hémoglobinurie ;
• La maladie est enregistrée le plus souvent pendant la période hivernale lorsque les animaux sont gardés en stabulation (de novembre à avril).

Diagnostic différentiel. Lors du diagnostic de l'hémoglobinurie post-partum, le vétérinaire doit exclure les maladies hémosporidiales, les intoxications par des poisons végétaux et minéraux.

Traitement. Les propriétaires doivent fournir aux vaches malades un logement chaud, sec et sans courants d'air. Aliments de mauvaise qualité (congelés, pourris, moisis, ensilage avec contenu élevé acide butyrique etc.). Nous passons à une alimentation diététique, composée d'aliments riches protéine végétale, glucides et carotène, de minéraux– fournir suffisamment de phosphore. Comme complément minéral en phosphore, nous incluons dans l'alimentation du phosphate de sodium disubstitué à raison de 50 g par jour. Pour éviter l'apparition de modifications dégénératives dans les reins d'une vache malade, les vaches malades doivent recevoir du lait écrémé ou du lactosérum à raison de 5 à 10 litres par jour. Pour augmenter la résistance du corps et normaliser les processus métaboliques, nous administrons par voie intramusculaire du tétravit à la dose de 10 ml, du sélévit, etc.

Pour soulager l'acidose et neutraliser les toxines formées dans le pré-estomac, la vache reçoit 80 à 100 g de bicarbonate de sodium par voie orale sous la forme d'une solution à 5 à 10 % deux fois par jour pendant 3 à 4 jours.

Nous administrons par voie intraveineuse des solutions de glucose à 20-40% de 150-200 ml, 2 mg de strophanthine, 20-30 ml de métapyrine pour environ 500 kg de poids vif. Ce traitement est effectué quotidiennement jusqu'à amélioration notable de l'état général de la vache. Pour maintenir la fonction hépatique, des préparations de méthionine, des vitamines B12 et E peuvent être prescrites. Pour maintenir l'activité cardiaque, injectez par voie sous-cutanée 4 à 5 g de caféine dans une solution à 20 % 2 à 3 fois par jour pendant 3 à 5 jours.

En cas de carence en phosphore dans l'organisme, il est administré : par voie parentérale (urzolit, 500 ml/500 kg de poids corporel) ou par voie orale (50 g de phosphate disodique ou 250 g de rachitine).

Pour stimuler l'hématopoïèse, nous prescrivons une transfusion de sang compatible (jusqu'à 4 litres) simultanément à l'administration orale de préparations de fer et de cuivre et de préparations intramusculaires de dextrine de fer. Pendant la période de récupération, des injections intramusculaires de Campolon (0,05 à 0,08 ml pour 1 kg de poids corporel) sont prescrites avec un intervalle de 8 à 14 jours, Vitogepad.

Prévention. La prévention de l'hémoglobinurie post-partum chez la vache repose sur alimentation équilibrée alimentation des vaches au vêlage profond et au vêlage frais. Les régimes doivent être complets en termes de protéines, de glucides, de vitamines et de minéraux, contenir quantité suffisante le phosphore et son rapport correct avec le calcium. Les vaches au cours du dernier mois de gestation ne doivent pas être nourries en grande quantité betteraves sucrières et ses produits. Vous devez ajouter chaque jour 150 à 200 g d'un mélange de minéraux contenant une grande quantité de phosphore à votre alimentation. Pendant la période hivernale de stabulation, les animaux doivent faire de l'exercice actif.

La quantité d'hémoglobine peut être déterminée soit par spectroscopie, en déterminant la quantité de fer, soit en mesurant le pouvoir colorant du sang (colorimétriquement).

Utilisé à des fins cliniques dernière méthode, qui nécessite une petite quantité de sang et permet de déterminer rapidement la quantité d'hémoglobine. La plus courante est la méthode Govers dans une modification de Sali.

La détermination de l'hémoglobine selon Saly est basée sur le fait que l'hémoglobine sanguine dans une solution d'acide chlorhydrique se transforme en hématine acide chlorhydrique, qui est comparée à l'hématine d'une certaine concentration, prise comme étalon. Le pourcentage d'hémoglobine dans ce cas est déterminé par colorimétrie.

Le kit de Sali se compose d'un tube à essai standard scellé rempli d'une solution de chlorhydrate d'hématine. Étant donné que le liquide standard s'estompe assez rapidement, dernièrement les étalons étaient produits à partir de verre coloré, coloré pour correspondre à la couleur du chlorhydrate d'hématine avec des oxydes métalliques. Ces normes ne s'estomperont pas même lorsqu'elles sont exposées à la lumière directe du soleil.

Entre les tubes à essai standards est placé un tube à essai comportant des divisions de 10 à 140 ou de 10 à 170 du même diamètre que le premier. Un tube à essai avec des divisions de 10 à 140 est destiné à déterminer l'hémoglobine en unités Sali et de 10 à 170 en pour cent.

Le support, dans lequel sont placés les tubes à essai étalons et gradués, est un bloc de bois percé de trous longitudinaux découpés et d'évidements pour eux. Du verre dépoli est fixé à l'arrière du coussin, ce qui donne lumière diffuse; sur son fond, la couleur de l'étalon et du sérum à tester est nettement ombrée.

Pour collecter le sang, une pipette capillaire avec une marque de 20 mm est incluse, qui détermine la quantité de sang prélevée pour le test.

En plus d'un hémoglobinomètre, pour déterminer l'hémoglobine, vous devez disposer d'une solution N/10 de HC1 et d'eau distillée.

La technique de détermination est la suivante. Une solution N/10 de HC1 est prélevée dans une éprouvette graduée jusqu'au trait 20, puis le sang est aspiré dans le capillaire jusqu'au repère 20 mm3 et, après avoir soigneusement nettoyé l'extrémité du capillaire, il est transféré dans l'éprouvette.

Avec de l'acide chlorhydrique. Le sang est soigneusement soufflé dans la solution d'acide chlorhydrique A710, le contenu du tube à essai de la couche transparente supérieure est aspiré dans le capillaire et refoulé dans le tube à essai.

Le capillaire est lavé 2 ou 3 fois et soigneusement retiré du tube. Le sang est hémolysé et lors de la décomposition, de l'acide chlorhydrique se forme de l'hématine. Le liquide vire progressivement au brun. 5 à 7 minutes après avoir expulsé le sang, de l'eau distillée commence à être ajoutée au tube à essai. Au début, ajoutez quelques gouttes, puis, à mesure que la couleur change et se rapproche de la norme, ajoutez une goutte. Le sang est mélangé soit avec une tige de verre munie d'un épaississement à l'extrémité, soit en secouant l'échantillonneur. Il faut veiller à ce qu'aucun liquide ne soit perdu pendant le mélange.

Le niveau de liquide après dilution indique la quantité d'hémoglobine. La comptabilité est effectuée le long du ménisque inférieur du liquide. Erreur acceptable dans une étude secondaire du même sang, une divergence dans cinq divisions est prise en compte. La marque 80 sur un tube à essai avec des divisions jusqu'à 140 et le chiffre 100 sur un tube à essai avec des divisions jusqu'à 170 correspondent à 16,0-17,0 d'hémoglobine dans 100 ml de sang. Pour obtenir un chiffre absolu indiquant la quantité d'hémoglobine en grammes dans 100 ml de sang, il est nécessaire de multiplier les lectures de l'hémomètre en pourcentage Sali par 0,17 et la quantité en unités par un facteur de 0,2125.

La quantité d'hémoglobine chez les animaux sains varie dans les limites suivantes (voir tableau page 418).

Les fluctuations de l'hémoglobine dépendent de l'âge, du sexe, de la race, des habitudes alimentaires et de certaines autres conditions. À processus pathologiques la quantité d'hémoglobine peut être augmentée ou diminuée par rapport aux niveaux normaux.

Une augmentation de la quantité d’hémoglobine est appelée pléiochromie. Cela peut survenir à la suite d'un épaississement du sang dû à une perte de liquide du corps (diarrhée, vomissements, transpiration), avec formation d'exsudats et de transsudats. La pléiochromie est observée dans les maladies hémorragiques des chevaux, les intoxications et les empoisonnements. Une augmentation de la quantité d'hémoglobine est observée lorsque le cheval est physiquement stressé. Avec une bonne préparation (entraînement), la quantité d'hémoglobine reste quasiment inchangée.

Une diminution de l'hémoglobine (oligochromémie) se produit assez souvent, notamment dans les maladies associées à l'anémie. L'oligochromémie est un symptôme d'affection aiguë et maladies chroniques, d'origine différente.

L'oligochromémie est associée à une diminution du nombre total de globules rouges ou à une déplétion des globules rouges en hémoglobine. Par conséquent, l’oligochromémie détermine non seulement le degré, mais aussi la nature de l’anémie. Il faut cependant tenir compte du fait que évaluation correcte ne peut être effectué que si les globules rouges sont comptés et la valeur de l'indice de couleur est déterminée.

Détermination de l'indicateur de couleur. L'indicateur de couleur donne une idée du rapport hémoglobine/rouge cellules sanguines. La méthode de détermination de l'indice de couleur est basée sur la comparaison. Si normalement l'indicateur de couleur est d'environ un, alors une variation de ce nombre vers une augmentation ou une diminution est considérée comme très indicateur important perturbations du rapport entre les globules rouges et l'hémoglobine.

Chez l'animal, la détermination de l'indice de couleur s'effectue selon la formule :

Hémoglobine 2 Globules rouges 2 Hémoglobine 2 x globules rouges 1

Hémoglobine 1 / globules rouges 1 = hémoglobine 1 x globules rouges 2

Où hémoglobine 1 et érythrocytes 1 montre la quantité moyenne d'hémoglobine et d'érythrocytes chez un animal sain et hémoglobine 2 et érythrocytes 2 est la quantité trouvée d'hémoglobine et d'érythrocytes chez les animaux étudiés. Si un cheval a une quantité normale d'hémoglobine de 75 et d'érythrocytes de 7 500 000, alors l'indicateur de couleur sera égal à un. Tout écart dans la quantité d'hémoglobine et de globules rouges entraînera une modification de l'indicateur de couleur. Il est nécessaire de prendre en compte uniquement les écarts par rapport à la norme supérieurs à 15 %. Déviations mineures ne doit pas être pris en compte.

La détermination de l'indicateur de couleur est importante pour différencier l'anémie. À anémie posthémorragique lorsqu'il y a une diminution simultanée du nombre de globules rouges et de l'hémoglobine, l'indicateur de couleur se rapproche de un ; Un indicateur de couleur inférieur à un se produit en cas d'anémie secondaire, dans laquelle la quantité d'hémoglobine diminue, avec un nombre de globules rouges presque normal ou légèrement réduit ; Un indicateur de couleur supérieur à un est observé dans l'anémie hémolytique, lorsqu'un nombre important de jeunes cellules sont libérées dans la circulation sanguine (régénération accrue).

Pour juger de la saturation moyenne des globules rouges en hémoglobine, on peut pratiquement utiliser la détermination du nombre sanguin. Il est obtenu en divisant la quantité d'hémoglobine trouvée par le nombre de globules rouges en millions, par exemple :

75% / 7(000000) = 11 ou 90% / 10(000000) =9

La valeur du nombre sanguin varie selon les animaux et dépend du nombre de globules rouges et d'hémoglobine dans la norme, mais en moyenne elle approche 10.

LEÇON 17. Obtention de sang, détermination de la vitesse de sédimentation et de la rétraction des érythrocytes caillot de sang

Le lieu de la leçon est une clinique et un laboratoire.

Objectif de la leçon :

Maîtriser la technique du prélèvement de sang sur les animaux.

Apprenez à déterminer la vitesse de sédimentation des érythrocytes et la rétraction du caillot sanguin.

Indicateurs RSE différents types animaux et déviations.

Indicateurs de l'indice de rétraction des caillots sanguins chez les chevaux et les bovins et en pathologie.

Pour obtenir une grande quantité de sang, on le prélève sur des bovins, des moutons, des chèvres, des chevaux de veine jugulaireà l'aide d'aiguilles de saignée, chez les porcs - à partir de la queue, de l'artère caudale et de la veine cave croniale.

Une petite quantité de sang peut être obtenue chez les animaux à partir des vaisseaux sanguins de l'oreille, chez les poulets à partir du peigne ou des boucles d'oreilles.

Détermination de la vitesse de sédimentation des érythrocytes

selon Nevodov

0,04 g de poudre de citrate de sodium sont pesés dans l'érythrosédiomètre, puis du sang y est prélevé jusqu'à « 0 » depuis la veine jugulaire (après avoir préalablement préparé le champ). Retournez soigneusement l'érythrosédiomètre jusqu'à ce que la poudre soit complètement dissoute. S’il y a plus de « 0 » de sang, l’excédent est aspiré à l’aide d’une pipette. Après avoir placé le tube à essai sur un support, surveillez l'évolution de la réaction toutes les 15 minutes pendant une heure, puis notez-la au bout de 24 heures.

Selon Panchenkov

Après lavage avec une solution de citrate de sodium à 5 % fraîchement préparée, le capillaire est rempli de la même solution jusqu'au repère P ou division 50 et libéré sur un verre de montre ou dans un tube à essai, puis le sang est prélevé deux fois jusqu'au repère K ou division. 100 et libéré sur le même verre de montre ou dans un tube à essai, mélangé et le mélange est prélevé sans bulles d'air dans un autre capillaire, lavé au citrate de sodium, qui est placé dans un support et on observe l'évolution de la réaction. L'ESR est prise en compte au bout d'1 heure et exprimée en millimètres.

Chez les animaux en bonne santé, les indicateurs horaires sont : pour les bovins - 0,5-1,5 ; chez les moutons - 0,5-1,0 ; chez les chevaux - 40-70 ; chez les porcs - 2-9 ; chez les chiens - 2-6 ; chez les poulets - 2-3 mm.

Détermination de la rétraction du caillot sanguin

selon P. V. Kaimakov

Du sang à raison de 10 ml est prélevé dans un tube à essai sec, bien lavé et purifié avec de l'alcool et de l'éther, et laissé 24 heures à température ambiante.

Après 24 heures, le sérum déposé est aspiré avec une pipette et sa quantité est mesurée dans un tube doseur, après quoi l'indice de rétraction (RI) est déterminé en divisant la quantité de sérum par le volume sanguin initial.

Exemple : 10 ml de sang et 5 ml de sérum sont prélevés

I.R. 10 = 0,5

L'I.R. chez un cheval varie de 0,3 à 0,7, avec une moyenne de 0,53.

Chez les bovins, il est de 0,4 à 0,6.

Résultats de la recherche.

Indicateurs de vitesse de sédimentation érythrocytaire :

dans 15 minutes

dans 30 minutes

dans 45 minutes

dans 1 heure

dans 24 heures

Indice de rétraction des caillots sanguins

Conclusion

Matériel pédagogique, matériel de démonstration, animaux

Tubes Nevodov ou érythrosédiomètres

Appareil Panchenkov

Citrate de sodium

Solution de citrate de sodium à 5 %

Tubes à essai d'un diamètre de 1,5 cm

1. Aiguilles de prélèvement sanguin

2. Teinture Yoda

   Éther d'alcool

   Tableaux avec Indicateurs RSE et IR chez les animaux

Animaux : Bovins, chevaux, porcelets

VIII. Évaluation du travail de l'élève par l'enseignant.

LEÇON 18. Compter le nombre de globules rouges, déterminer l'hémoglobine dans le sang et l'indice de couleur

Le lieu de la leçon est une clinique, un laboratoire.

Le but de la leçon est de maîtriser les méthodes de comptage des globules rouges et de détermination de l'hémoglobine.

Enquête actuelle auprès des étudiants sur les questions suivantes :

Indicateurs de globules rouges et d'hémoglobine chez différentes espèces animales.

Leurs déviations dans diverses conditions physiologiques et pathologiques.

Explication de la méthodologie de l’enseignant pour effectuer le travail.

Exécution des travaux par les étudiants.

Compter le nombre de globules rouges.

Le sang est aspiré dans le mélangeur jusqu'au repère 0,5 ou 1. L'extrémité du mélangeur est essuyée du sang, puis la solution physiologique est aspirée dans le capillaire jusqu'au repère 101. Cela entraîne une dilution de 200 ou 100 fois. Lorsque le mixeur est rempli de sang et solution saline, ses extrémités sont pincées entre le pouce et l'index et secouées vigoureusement à plusieurs reprises.

Avant de charger la chambre, le contenu du mélangeur est à nouveau soigneusement mélangé et introduit sous un couvercle en verre. Pour garantir que la hauteur de la chambre ne change pas, il est nécessaire d'essuyer fermement le verre de protection jusqu'à ce qu'on appelle. Anneaux newtoniens.

La chambre chargée est placée sous le microscope sans immersion. Le comptage des globules rouges commence par le carré situé dans le coin gauche, puis passe aux autres carrés.

Il faut compter dans 5 grands carrés tous les globules rouges se trouvant à l'intérieur du carré et sur ses lignes internes.

Les globules rouges comptés dans cinq grands carrés sont additionnés et le contenu du nombre de globules rouges dans 1 mètre cube est déterminé. mm. sang selon la formule suivante : M. 4 000 . à

Le nombre de globules rouges X est égal au nombre de cellules comptées dans cinq grands carrés M multiplié par 4 000 et au degré de dilution y divisé par 80 (le nombre de petits carrés).

Le volume d’un petit carré est de 1/4 000 mètres cubes. m., et donc, pour obtenir une quantité de 1 cube. mm. le nombre de globules rouges doit être multiplié par 4 000.

Il faut faire un calcul comme suit: le nombre de globules rouges dans 5 carrés est multiplié par 10 000 lorsqu'il est dilué par 200 et

par 5 000 lorsqu'il est dilué par 100.

Méthode par tube pour compter les globules rouges.

4 ml de solution saline sont versés dans un tube à essai Florinsky propre. Le sang est prélevé dans une pipette à partir d'un hémomètre Sali (0,02 ml), soigneusement soufflé dans un tube à essai avec une solution saline, la pipette est lavée, bouchée et soigneusement mélangée. Dilution 1:200.

Le sang prélevé dans le tube à essai est secoué plusieurs fois avant de remplir la chambre. La chambre est remplie à l'aide d'une pipette Pasteur ou de l'extrémité d'une tige ronde en verre, il est important que toute la surface sur laquelle la grille est appliquée soit remplie de liquide. Le calcul s'effectue de la manière habituelle en tenant compte de la dilution.

Dans le cadre de la transition vers l'utilisation du Système international d'unités SI dans le diagnostic de laboratoire clinique, l'atelier présente également de nouvelles unités ainsi que les anciennes unités physiques. Par exemple : au lieu d'exprimer le nombre d'érythrocytes en millions/μl et les leucocytes en milliers/μl, il faut indiquer le nombre d'érythrocytes en 10 12 l, et les leucocytes en 10 9 l.

Le nombre d'érythrocytes chez les animaux adultes sains en millions/μl ou 10 12 l ;

KRS 4,5-7,5 ; moutons - 7,6-11,2 ; chevaux - 5,5-9,0; porcs - 4,0-7,5; chiens - 5,2 à 8,4 ; poulets - 2,5-5,0.

Détermination de l'hémoglobine. La méthode de Sali

À l'aide d'une pipette, mesurez jusqu'à la 10ème division ou jusqu'au repère circulaire portant le chiffre 2 g pour cent dans un tube à essai gradué. solution d'acide chlorhydrique décinormale. Le sang est aspiré dans un capillaire jusqu'à 20 mm et soigneusement, après avoir nettoyé l'extrémité du capillaire, le sang est transféré dans un tube à essai avec une solution décinormale de HCl afin qu'il ne reste aucune trace de sang sur les parois du capillaire, rincé encore trois fois avec le même acide, en essayant de ne pas faire mousser le liquide.

Le sang est hémolysé et de l’hématine d’acide chlorhydrique se forme.

Après 5 à 7 minutes, de l'eau distillée est ajoutée au tube à essai. Mise aux normes de la coloration.

Le chiffre correspondant au niveau de liquide le long du ménisque inférieur dans le tube à essai indique la quantité d'hémoglobine selon Saly ou g\100 ml.

Détermination de l'indice de couleur

L'indice de couleur est calculé à l'aide de la formule :

où CPU est l'indice de couleur ;

H1 - la quantité moyenne d'hémoglobine est normale, g pour 100 ml (ou g\l) ;

H2-quantité d'hémoglobine chez l'animal étudié, g pour 100 ml (ou g/l) ;

E1 - le nombre moyen de globules rouges est normal, million \ μl (ou 10 12 \ l) ;

E2-nombre d'érythrocytes chez l'animal étudié, mdn\µl

(ou 10 12 \l).

L'indice de couleur du sang chez les animaux en bonne santé est : chez les bovins - 0,7-1,1 ; chez les moutons - 0,5-0,7 ; chez les chevaux - 0,8-1,2 ; chez les porcs - 0,8-1,0 ; chez les chiens - 0,8-1,2 ; chez les poulets - 2-3.

Résultats de la détermination :

Globules rouges.

Hémoglobine.

Indice de couleur.

Conclusion.

Microscope.

Chambre de comptage de Goryaev.

Mélangeur pour globules rouges.

Solution saline.

Lamelles de couverture.

Hémoglobinomètre Sali.

Eau distillée.

Solution d'acide chlorhydrique décinormale.

Pipettes graduées à 1 et 5 ml, pipettes de l'hémomètre de Sali.

Tableaux avec indicateurs de globules rouges et d'hémoglobine chez les animaux.

Animaux : Bovins, chevaux, porcelets.

LEÇON 19. Compter le nombre de leucocytes. Préparation et coloration des frottis. Suppression de l'hémogramme, du profil hématologique et leucocytaire

Le lieu du cours est la clinique et le laboratoire du département.

Objectif de la leçon :

Maîtrisez la technique de comptage des leucocytes.

Acquérir des compétences en préparation et en peinture de frottis.

Dériver des formules leucocytaires de différentes espèces animales.

Déterminer le profil leucocytaire chez les bovins.

Enquête actuelle auprès des étudiants sur les questions suivantes :

Indicateurs de leucocytes chez différentes espèces animales.

Leurs changements en fonction de certaines conditions physiologiques et pathologiques.

Le concept de formule leucocytaire et de profil leucocytaire.

Indicateurs formule leucocytaire chez les bovins et les chevaux.

Modifications morphologiques des leucocytes.

Explication de la méthodologie de l’enseignant pour effectuer le travail.

Exécution des travaux par les étudiants.

Nombre de leucocytes.

Le sang est aspiré dans un mélangeur ou un mélangeur jusqu'au niveau de 0,5 ou 1 (de l'oreille ou du sang citraté). Puis une solution à 2% est versée dans le même mélangeur acide acétique au repère 11, on obtient une dilution de 20 fois. Après avoir soigneusement mélangé, les deux premières gouttes sont retirées du mélangeur et une goutte de taille moyenne est introduite sous un couvercle en verre dans la chambre (préalablement broyée). Le critère du frottement du verre dans la chambre est la formation d'anneaux newtoniens. La règle de comptage est que la chambre chargée est placée sous le microscope sans immersion. Les leucocytes sont comptés dans 100 grands carrés (soit 1600 petits). Il est permis de compter 75 grands carrés (soit 1200 petits).

une x 4000 x b

Formule de calcul : X =

où X est la quantité requise éléments façonnés dans 1 m 3 ;

a est la somme des éléments façonnés comptés dans un certain volume de la chambre ;

b-nombre de petits carrés comptés ;

c-dilution sanguine.

Le volume d'un petit carré est de 1\100 mm 3, alors dans 1 mm 3 de sang il y en aura 400 fois plus.

Exemple : (dilution du sang 20 fois).

Dans 1600 petits carrés (soit 100 grands) on compte 150 leucocytes, puis dans 1 m3 il y aura :

150x4000x20

1600 = 150x50 = 7500

ceux. la somme des leucocytes comptés dans 100 grands carrés doit être multipliée par 50.

Numération leucocytaire (méthode par tube)

Pipeter 0,4 ml de solution d’acide acétique dans un tube à essai propre. Le sang est collecté avec une pipette d'un hémomètre Sali-0,02 ml et soigneusement transféré dans un tube à essai contenant 3% d'acide acétique. Dilution 1:20. La chambre est remplie à l'aide d'un Pasteur ou de l'extrémité d'une tige de verre ronde ; il est important que toute la surface du grillage soit remplie de liquide. Le calcul s'effectue de la manière habituelle en tenant compte de la dilution.

Le nombre de leucocytes chez les animaux adultes sains (milliers µl ou 10 9 \l) ; pour les bovins - 6,5-9,5 ; chez les moutons - 6,6-10,6 ; chez les chevaux - 7,0-12,0; chez les porcs - 6,7-23,0 ; chez les chiens - 8,5-10,5 ; chez les poulets - 20,0-40,0.

Dérivation de la formule leucocytaire.

Le comptage des classes individuelles de leucocytes est effectué au microscope à immersion. Au total, au moins 100 cellules doivent être comptées dans le frottis, de préférence 200. Il existe des méthodes de comptage selon Meander-4-pole et Mukhin (trois lignes perpendiculaires au frottis en son centre).

Leucogramme sanguin d'animaux sains, %

Neutrophiles

Animaux B E M Y P S L M

*) Pseudoéosinophiles.

Détermination du profil leucocytaire.

Les leucocytes sont comptés par classe sur la base de 100 cellules, la formule leucocytaire est dérivée, après quoi un recalcul est effectué en fonction du nombre de leucocytes en mm 3.

Exemple : s'il y a 60 lymphocytes pour 100 cellules comptées, et quantité totale leucocytes dans 1 mm 3 est égal à 10 000, alors selon la formule :

100-60 10 000 x 60

10 000- X X = 100 = 6 000

Ensuite, les autres classes sont recalculées.

Les données reçues sont marquées d'un point dans la colonne correspondante d'un formulaire spécial.

En reliant les points par une ligne, une image graphique du profil leucocytaire est obtenue. Il permet de déterminer si l'animal présente une leucocytose relative ou absolue.

Résultats de la recherche.

Indicateurs de formule leucocytaire et pathologique

changements dans les leucocytes.

I. Leucocytes (milliers\ µl) :

basophiles% ;

éosinophiles % ;

myélocytes% ;

• poignarder %;

  % segmenté ;

  lymphocytes % ;

  monocytes % ;

  Cellules turques%.

Changements pathologiques :

anisocytose;

poïkilocytose;

Détermination du profil leucocytaire.

Détermination du profil hématologique

Conclusion

Matériel pédagogique, matériel de démonstration, animaux :

Microscope

Chambre de comptage de Goryaev

Mélangers pour les leucocytes

Verre de couverture au sol.

Solution d'acide acétique à 2-3%, teintée au bleu de méthylène.

Tubes à essai de laboratoire avec bouchons en caoutchouc

Pipettes graduées à 1 et 5

Pipettes de l'hémomètre de Sali

Glissière (propre, dégraissée)

Verre dépoli

Peinture Romanovsky-Giemsa

Eau distillée

Bains émaillés

Huile d'immersion

Tableaux avec indicateurs de la formule leucocytaire, du profil leucocytaire et hématologique.

VIII. Évaluation du travail des élèves par l'enseignant.

LEÇON 20. Définition calcium total et phosphore inorganique dans le sérum sanguin

Le but de la leçon est d'apprendre à déterminer la quantité de calcium et de phosphore inorganique dans le sérum sanguin et à donner évaluation clinique résultats de recherche.

Enquête actuelle auprès des étudiants sur les questions suivantes :

Le rôle physiologique du calcium dans le corps animal.

Indicateurs du calcium total dans le sérum sanguin chez divers types d'animaux de ferme et leurs modifications.

Le rôle physiologique du phosphore dans le corps animal.

Indicateurs de phosphore inorganique dans le sérum sanguin des animaux de ferme et leurs modifications

Explication de la méthodologie de l’enseignant pour effectuer le travail.

Exécution des travaux par les étudiants.

Détermination du calcium dans le sérum sanguin par la méthode de-Ward.

Placez 0,5 ml de sérum sanguin dans un petit tube à centrifuger et 0,5 ml d'eau distillée dans l'autre. Ensuite, 0,5 ml d'une solution aqueuse saturée d'oxalate d'ammonium est ajouté dans chaque tube à essai.

Après 30 minutes, les tubes sont centrifugés pendant 15 minutes. Le sérum est aspiré, 1 à 2 ml d'eau distillée sont ajoutés au sédiment et centrifugés à nouveau pendant 3 à 5 minutes.

On aspire ensuite le liquide et on ajoute au précipité 0,3 ml d'acide sulfurique dilué au 1:2 avec de l'eau. Le mélange est chauffé au bain-marie à 50-65% et titré avec une solution de permanganate centinormal (KMnO4) jusqu'à apparition d'une couleur rose qui persiste 2 minutes.

La quantité de calcium en milligrammes pour cent est calculée à l'aide de la formule : (a - k) x 2 x 0,2 x 100, où

a est la quantité de solution de permanganate centinormale utilisée pour titrer le sérum ;

k est la quantité de permanganate consommée pour le titrage de contrôle de l'eau distillée ;

0,2 - la quantité de calcium en milligrammes correspondant à 1 ml d'une solution de permanganate centinormale ;

2 - multiplicateur pour calculer la quantité de calcium dans 1 ml de sérum sanguin ;

100 est un multiplicateur permettant de calculer la quantité de calcium en milligrammes pour cent dans 100 ml de sérum sanguin.

La quantité de calcium total (mg pour 100 ml) chez les bovins est de 10,1 à 12,5 ; chez les chevaux - 12,0-15,5 ; chez les porcs - 10,5-12,5 ; chez les oiseaux - 11,0-15,0.

Détermination du phosphore inorganique dans le sérum sanguin

selon Ammon et Ginsberg (modifié par S.A. Ivanovsky).

Ajouter 3 ml d'eau distillée, 1 ml de sérum test et 1 ml de solution d'acide trichloroacétique à 20 % dans un tube à centrifuger et bien mélanger. Après 5 minutes, centrifuger à 3 000 tr/min. dans les 15 minutes. (ou filtrer sur un filtre à benzène). Ensuite, 2,5 ml de centrifugation (ou filtrat) transparent, 0,5 réactif de molybdène, 1 ml de solution d'acide ascorbique à 1% et 6 ml d'eau distillée sont versés dans le tube à essai. Dans le même temps, 3 ml d'une solution étalon de travail de phosphore, 0,5 ml de réactif molybdène, 1 ml de solution d'acide ascorbique à 1% et 5,5 ml d'eau distillée sont ajoutés dans un autre tube à essai (standard). Après 10 minutes, les liquides des deux tubes à essai sont colorimétriques à l'aide d'un colorimètre photoélectrique utilisant un filtre vert dans des cuvettes de 10 mm de large.

Le calcul se fait à l'aide de la formule :

Ex x 0,05 x 100 Ex x 10

X = Ek x 0,5 Ek, où

X est la quantité de phosphore inorganique dans le sérum sanguin à tester, en mg pour 100 ml ;

Ex - densité optique de l'échantillon avec centrifugation de sérum ;

Ek est la densité optique de l'échantillon avec une solution étalon de phosphore (standard) ;

0,05 - quantité de phosphore dans le volume de solution étalon de travail de phosphore prélevé pour analyse, mg ; Coefficient 100 pour indiquer la quantité de phosphore pour 100 ml de sérum sanguin.

Le sérum sanguin des animaux adultes contient normalement la quantité suivante de phosphore inorganique (mg pour 100 ml) : pour les bovins - 5,0-6,5 ; chez les porcs - 7,7-9,5 ; chez les chevaux - 5,1-6,0 ; chez la volaille - 5,6-8,0 ; chez les moutons - 4,5-7,5.

Résultats.

Quantité de calcium (mg%).

Quantité de phosphore inorganique (mg %).

Conclusion.

Matériel de formation, matériel de démonstration.

Réactifs : saturés solution aqueuse l'oxalate d'ammonium,

solution centinormale de permanganate de potassium, acide sulfurique dilué 1:2, solution à 20 % d'acide trichloroacétique ; réactif au molybdène (préparé en mélangeant une solution composée de 5 g de molybdate d'ammonium et 60 ml d'eau distillée avec une solution préparée à partir de 15 ml de H2 SO4 concentré et 25 ml d'eau distillée) ; Solution à 1 % d'acide ascorbique dans une solution de HCl 0,1 N ; solution étalon basique de phosphore (4,394 g KN 2 PO 4) séchée jusqu'à masse constante sur HSO dans un dessiccateur et eau distillée jusqu'à 1 l) ; solution étalon de travail de phosphore (2 ml de solution mère et eau distillée jusqu'à 100 ml + 20 ml de solution d'acide trichloroacétique à 20 % ; 3 ml de solution contiennent 0,5 mg de phosphore ; eau distillée).

Tubes à essai.

Pipettes graduées.

Filtres à benzène.

1. Colorimètre photoélectrique.

2. Sérum sanguin.

   Bain-marie.

   Thermomètre chimique.

   Centrifuger.

Évaluation du travail des élèves par l'enseignant.

LEÇON 21. Détermination de la capacité acide et du carotène dans le sérum sanguin

Le lieu du cours est le laboratoire du département.

Objectif de la leçon :

Maîtriser la méthodologie d'étude de la capacité acide du sang.

Apprenez à déterminer le carotène dans le sérum sanguin et à donner une évaluation diagnostique des résultats des tests.

Enquête actuelle auprès des étudiants sur les questions suivantes :

Qu'est-ce qu'un réservoir d'acide et indicateurs normaux réservoir d'acide différents types animaux de ferme.

Types de troubles de l'équilibre acido-basique.

Le rôle physiologique du carotène, sa teneur chez les animaux dans des conditions normales et en pathologie.

Explication de la méthodologie de l’enseignant pour effectuer le travail.

Exécution des travaux par les étudiants.

Détermination de l'alcalinité de réserve du sérum sanguin

selon I.P. Kondrakhin.

Verrerie : flacons appariés, pipettes.

Réactifs :

Solution de NaOH 0,01 N (soude caustique) ;

Solution à 5 % de H2SO4 ;

Solution alcoolique à 1% de phénolphtaléine ;

Solution 0,01 N de H2SO4 (acide sulfurique).

Avancement de l'étude. 0,5 ml de sérum (ou de plasma sanguin) sont ajoutés à la moitié du flacon ; il n'est pas permis de souffler le liquide restant de la pipette ; celle-ci est bien fermée avec un bouchon ; Prélever 2 ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,01 N dans la seconde moitié du ballon et fermer celui-ci avec un bouchon. Ouvrez ensuite la première moitié du flacon et ajoutez 1 ml d'une solution d'acide sulfurique à 5 % au sérum sanguin qui s'y trouve et fermez-le rapidement avec un bouchon. En effectuant des mouvements de rotation, mélangez soigneusement le sérum avec l'acide. Pendant la réaction, le mélange est répété 3 à 4 fois.

Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,01 N dans le tube témoin et fermer hermétiquement avec un bouchon. Prélevez 1 ml d'une solution d'acide sulfurique à 5 % dans la seconde moitié du flacon apparié et fermez-le avec un bouchon. Avant de fermer les trous des flacons, les bouchons sont humidifiés avec de l'eau distillée.

Pour une plus grande précision, chaque échantillon de sérum est testé dans deux flacons appariés. L'expérience témoin est réalisée dans trois flacons doubles.

Après 4 à 6 heures (jusqu'à 12 heures sont acceptables), les flacons sont ouverts. Dans lequel se trouve une solution d'hydroxyde de sodium, ajoutez une goutte d'une solution alcoolique à 1% de phénolphtaléine. Mélanger (la couleur rouge apparaît). Le liquide dans le flacon est ensuite titré avec de l'acide sulfurique 0,01 N jusqu'à décoloration complète, ce qui se produit à pH 8. Le titrage doit être effectué avec précaution et à la même vitesse dans tous les échantillons et contrôles.

Le calcul s'effectue selon la formule :

X = (une - 6) x 0,224 x 200 = (une - 6) x 44,8

où : alcalinité de réserve X (en pourcentage en volume) CO ;

a-quantité de solution d'acide sulfurique 0,01 N utilisée pour le titrage de l'échantillon à tester, ml ;

b-quantité de solution d'acide sulfurique 0,01 N utilisée pour le titrage de l'échantillon d'essai, en ml ;

0,224 facteur de conversion d'une solution 0,01 N d'acide sulfurique en CO pour cette réaction ;

Coefficient 200 pour recalculer la quantité de sérum sanguin (plasma) prélevée pour analyse (0,5 ml pour 100 ml.)

Indicateurs normaux capacité d'acide sanguin (mg pour 100 ml); Bovins-460-540, moutons-460-540, chèvres-380-520, chevaux-500-600, porcs-500-600, chiens-450-550.

Détermination du carotène dans le sérum sanguin

(d'après V.F. Koromyslov et L.A. Kudryavtseva)

Ajouter 1 ml de sérum sanguin et 3 ml d'alcool éthylique à 95% dans un tube à essai, mélanger soigneusement avec une tige de verre, ajouter 6 ml d'éther de pétrole, agiter vigoureusement pendant 2 minutes et verser délicatement 0,5 ml d'eau distillée le long de la paroi de le tube à essai, laisser reposer jusqu'à séparation claire des phases aqueuse et organique. Après cela, 4,5 ml d'extrait de carotène sont soigneusement versés et transférés dans une cuvette.

Colorimètrer à l'aide d'un photoélectrocolorimètre dans des cuvettes de 1 cm avec un filtre bleu contre l'éther de pétrole (essence). Dans le même temps, une solution étalon de travail de bichromate de potassium est colorimétrique (5 ml d'eau distillée sont mélangés avec 5 ml de bichromate de potassium basique).

Le calcul se fait selon la formule : A

où : X est la quantité de carotène dans le sérum, en mg pour 100 ml ;

A-densité optique de l'échantillon d'essai ;

Densité optique B de la solution étalon de travail

dichromate;

1,248 est le coefficient de transfert de carotène en mg pour 100 ml de sérum sanguin.

Résultats de la recherche.

1. Indicateurs de la capacité acide du sérum sanguin.

Conclusion.

Matériel pédagogique, matériel de démonstration, animaux.

Solution chimique à 0,5% chlorure pur sodium préparé dans de l'eau bidistillée neutre.

Santin solution normale d'acide chlorhydrique.

L'indicateur est une solution aqueuse à 1% de peinture pourriture à l'alizarine.

Éther de pétrole.

Solution étalon de travail de bichromate de potassium.

Eau distillée

Tubes à essai

1. Sérum sanguin de divers animaux

   Colorimètre photoélectrique

Tous les récipients utilisés pour la neutralisation sont prétraités avec un mélange de chrome.

VIII. Évaluation du travail des élèves par l'enseignant.

LEÇON 22 . Détermination de la bilirubine et protéine totale

dans le sérum sanguin

Le lieu du cours est le laboratoire du département.

Le but de la leçon est d'apprendre à déterminer dans le sérum bilirubine sanguine, protéines totales et fournir une évaluation clinique des résultats de l'étude.

Enquête actuelle auprès des étudiants sur les questions suivantes :

L'importance de tester le sérum sanguin pour la teneur en bilirubine pour différencier les différentes formes de jaunisse.

Indicateurs des protéines sériques totales chez les animaux sains et leurs modifications.

Explication de la méthodologie de l’enseignant pour effectuer le travail

Exécution des travaux par les étudiants.

Détermination qualitative de la bilirubine dans le sérum sanguin

(d'après Van den Berg)

Prenez 2 petits bouchons. Dans le premier, on ajoute 0,5 ml du sérum à tester et 0,3 ml d'un mélange de réactifs diazoïques ; dans le second - 0,5 sérum, 0,5 ml d'alcool 96 0 et 0,3 ml d'un mélange de diazoréactifs (de l'alcool est ajouté au deuxième tube à essai pour détruire la liaison de la bilirubine indirecte avec la globuline sanguine).

Le contenu du tube à essai est agité avec un bâton fin et propre. La coloration rose dans le premier tube à essai indique une réaction directe, dans le deuxième tube à essai elle indique une réaction indirecte.

Détermination quantitative (selon Bokalchuk)

Pour plusieurs dilutions de sérum, prenez 6 petits tubes à essai et versez 0,5 ml de solution saline dans chacun, à l'exception du premier. sel de table, puis ajoutez 0,5 ml de sérum à tester dans les premier et deuxième tubes à essai.

Le sérum dans le deuxième tube à essai est soigneusement mélangé avec une solution saline, après quoi 0,5 ml du mélange est transféré dans le troisième tube à essai et également soigneusement mélangé, 0,5 ml du mélange du troisième tube à essai est transféré dans le quatrième tube à essai, etc. Le reste (0,5 ml) du dernier tube à essai est versé dans un gobelet de rinçage. Le résultat est une dilution :

Tube n°1 2 3 4 5 6

Taux de dilution 1 2 4 8 16 32

Ensuite, 0,5 ml d'alcool absolu (ou 96 degrés) est ajouté dans chaque tube à essai, agité et une suspension de protéines dans un extrait alcoolique de bilirubine est obtenue. 0,5 ml d'un mélange de réactifs diazoïques est versé dans le liquide devenu trouble en raison de la précipitation des protéines, et le contenu des tubes à essai est soigneusement mélangé avec une tige de verre. À la suite de la réaction, le sérum prend une couleur rose. La fin de la réaction est considérée comme une dilution, ce qui donne une subtile couleur rose. En multipliant la puissance

en divisant par 0,016, la quantité de bilirubine dans 1 ml de sérum sanguin est déterminée, et en la multipliant par 100, la quantité de bilirubine en milligramme% dans 100 ml de sérum. Dans le premier tube à essai, cette quantité sera de 1,6 mg%, dans le deuxième de 3,2, dans le troisième de 6,4, dans le quatrième de 12,8, dans le cinquième de 25,6 et dans le sixième de 51,2 mg%.

Détermination de la bilirubine dans le sérum sanguin (selon Kazakov)

Huit tubes à essai propres et secs sont placés dans un portoir. Ensuite, 0,5 ml du sérum à tester est ajouté à chaque tube à essai et le contenu est mélangé. De ce tube à essai, à l'aide d'une pipette, prélever 0,5 ml du mélange et le transférer dans le deuxième tube à essai, du deuxième 0,5 ml de liquide est transféré au troisième, etc. Du dernier (huitième) tube à essai, 0,5 ml du mélange est retiré dans l'égouttoir. On obtient ainsi des dilutions de sérum multiples de deux. Ajoutez ensuite 1 ml d'une solution d'acide trichloroacétique à 20 % dans chaque tube à essai et agitez soigneusement. Après cela, le contenu des tubes est versé dans des entonnoirs en papier filtre préalablement préparés, qui doivent être marqués en fonction de la dilution sanguine. Les entonnoirs sont laissés sécher à température ambiante. La réaction est enregistrée le lendemain. La fin de la réaction est considérée comme la dilution à laquelle une couleur verte bien visible reste sur le filtre.

Vous pouvez utiliser le tableau pour les calculs.

N° de tube Degré de dilution Quantité de bilirubine

dans 100 ml de sérum

Détermination des protéines totales dans le sérum sanguin

méthode réfractométrique

L'indice de réfraction des rayons lumineux (réfraction) est une valeur caractéristique de diverses substances. Il existe une relation entre la concentration d'une substance (dans ce cas, des protéines) et le degré de réfraction, qui est utilisé pour déterminer les protéines dans le sérum sanguin.

Pour chauffer les prismes, de l'eau passe à travers des tubes en caoutchouc pour établir une température constante de + 20 0. Avant le travail, repliez la partie supérieure de la tête de mesure. Appliquez une goutte de sérum test sur la surface du prisme de mesure avec une tige de verre et fermez soigneusement la tête.

En observant à travers l'oculaire du télescope et en tournant le volant à gauche, on trouve la frontière entre la lumière et l'ombre. Utilisez le volant de droite pour supprimer la bordure colorée. Ensuite, à l’aide du volant de gauche, l’interface est alignée avec précision avec le réticule et une lecture est effectuée sur l’échelle de l’indice de réfraction. La teneur en protéines du sérum étudié est calculée à l'aide d'un tableau spécial.

Indices de réfraction du sérum sanguin et quantités correspondantes de protéines totales.

Indicateurs de protéines totales dans le sérum sanguin chez les animaux sains (g pour 100 ml) ; pour les bovins – 6-8,5 ; chez les moutons - 6-7,5 ; chez les porcs - 6,5-8,5 ; chez les chevaux - 6,5-7,8 ; chez les chiens - 5,9-7,6 ; chez les poulets, il est de 4,3 à 5,9.

Résultats de la recherche.

Quantité de bilirubine (mg%)

Quantité de protéines totales (g%)

Conclusion.

Matériel pédagogique, matériel de démonstration, animaux.

1. Réactifs :

acide sulfanilique-1g ; acide chlorhydrique(poids spécifique 1,19) - 10 g ;

eau distillée - 200,0;

nitrate de sodium - 0,5 g, eau distillée - 100 ml.

Avant l'étude, préparer un mélange à base de 10 ml du 1er réactif 0,3 ou 0,6 ml du 2ème réactif.

Tubes à essai.

Pipettes graduées

1. Réfractomètre IRF-22

   Rincer les tasses

   Compte-gouttes

   Éther d'alcool

   Sérum sanguin

   Solution physiologique de sel de table.

   96 0 d'alcool.

   Solution d'acide trichloroacétique à 20 %

   Papier filtre

VIII. Évaluation du travail des élèves par l'enseignant.